Fișier de arhivă demo online de mediu - Orientare 67548EWG pentru aproximarea legii și a documentelor
B.32. Prima metodă
B.32. 1.1. introducere
Vezi introducerea generală partea B
B.32. 1.2. Definiții
Vezi introducerea generală partea B
B.32. 1.3. Substanțe de referință
B.32. 1.4. Principiul metodei
Substanța testată este administrată în mod normal grupelor de animale testate 7 zile pe săptămână pentru o parte mai mare a ciclului de viață utilizând o cale de administrare adecvată, o doză per grup. În timpul și după expunere, animalele testate sunt observate zilnic pentru semne de intoxicație, în special pentru dezvoltarea tumorilor
B.32. 1.5. Criterii de calitate
B.32. 1.6. Descrierea metodei
Înainte de începerea experimentului, animalele sunt aclimatizate pentru o perioadă de cel puțin 5 zile în condiții experimentale de adăpostire și hrănire. Înainte de începerea experimentului, animalele tinere sănătoase sunt randomizate și alocate numărului necesar de grupuri de tratament și control.
Animalul experimental preferat este șobolanul. Totuși, alte specii de animale (rozătoare sau non-rozătoare) pot fi utilizate pe baza rezultatelor studiilor anterioare. Testele trebuie efectuate cu animale tinere și sănătoase din tulpini comune de animale de laborator; administrarea substanței testate trebuie să înceapă o perioadă adecvată după înțărcare de la mamă.
La începutul experimentului, variabilitatea greutății corporale a animalelor nu trebuie să depășească ± 20% din valoarea medie. Dacă o determinare a toxicității subcronice orale precede un studiu pe termen lung, în ambele cazuri trebuie folosite aceleași specii de animale sau tulpini de animale testate.
Număr și sex
La rozătoare, trebuie utilizate cel puțin 100 de animale (50 femele și 50 masculi) pentru fiecare doză și grupul de control corespunzător. Femelele nu trebuie să fie nici așternute, nici să fie însărcinate. Dacă animalele urmează să fie ucise în timpul experimentului, numărul total de animale trebuie mărit cu numărul animalelor care urmează să fie ucise înainte de sfârșitul experimentului.
Doze și frecvența expunerii
Trebuie utilizate cel puțin trei grupuri de doză și un grup de control suplimentar. Cea mai mare doză trebuie aleasă astfel încât să apară doar simptome minore de intoxicație, cum ar fi creșterea întârziată în greutate corporală (mai puțin de 10%). Cu toate acestea, durata normală de viață a animalelor nu ar trebui să fie afectată de alte sechele în afară de sechele legate de tumori.
Cea mai mică doză nu trebuie să afecteze cursul normal de creștere și dezvoltare sau durata de viață a animalelor și nu trebuie să provoace semne de efecte toxice. În mod normal, ar trebui să fie nu mai puțin de 10 la sută din cea mai mare doză.
Doza medie este între cea mai mare și cea mai mică doză.
La selectarea dozelor, trebuie luate în considerare datele din experimentele anterioare.
Expunerea este de obicei zilnică. Dacă substanța este administrată în apă potabilă sau amestecată cu furajul, apa sau furajul trebuie să fie accesibil animalelor în orice moment.
Cu excepția expunerii la substanța testată, grupul de control trebuie să corespundă grupurilor de animale experimentale din toate punctele de vedere.
În condiții speciale, de ex. Atunci când se utilizează un aerosol în studiile de inhalare sau un emulgator cu efecte biologice necunoscute în studiile de toxicitate pe cale orală, recomandăm utilizarea unui grup de control suplimentar, netratat, căruia vehiculul nu trebuie să i se administreze.
Se utilizează în principal administrarea orală, cutanată și inhalativă. Alegerea căii de administrare depinde de proprietățile fizice și chimice ale substanței testate și de tipul de expunere umană.
Dacă substanța de testat este absorbită din tractul gastro-intestinal și expunerea la om pe cale orală este posibilă, trebuie selectată calea de administrare orală, cu condiția să nu existe contraindicații. Substanța testată trebuie administrată animalelor din furaje, dizolvate în apa potabilă sau în capsule.
Administrarea zilnică în 7 zile din săptămână este de dorit, deoarece cu un ritm de cinci zile în timpul perioadei fără administrare este posibilă recuperarea sau o scădere a simptomelor de intoxicație și poate influența astfel rezultatul și evaluarea. Din motive practice, totuși, un ciclu de administrare de cinci zile este considerat acceptabil.
Expunerea cutanată prin aplicare pe piele poate fi aleasă pentru a simula unul dintre modurile majore de expunere la om; servește și ca model pentru inducerea modificărilor pielii.
Deoarece studiile privind aplicarea prin inhalare pun probleme tehnice mai mari în comparație cu alte căi de administrare, sunt furnizate aici instrucțiuni mai detaliate. Trebuie remarcat faptul că instilarea intratraheală este o alternativă validă în cazuri speciale.
În cazul expunerilor pe termen lung, se ia de obicei o expunere umană presupusă ca bază, după care animalele sunt expuse 6 ore pe zi timp de 5 zile la o concentrație uniformă a camerei de testare (expunere intermitentă). Sau se presupune o posibilă expunere la mediu în care animalele sunt expuse substanței de testat timp de 22 până la 24 de ore în 7 zile (expunere continuă) și este prevăzută o oră pe zi pentru hrănirea și întreținerea camerei în același timp. În ambele cazuri, animalele sunt expuse în mod normal la o concentrație fixă a substanței testate. Principala diferență care trebuie luată în considerare între expunerea intermitentă și cea continuă este că, în primul caz, animalele se pot recupera după efectele expunerii zilnice într-o perioadă de 17-18 ore fără expunere și în perioada mai lungă de weekend.
Care dintre cele două forme de expunere este aleasă depinde de obiectivele studiului în cauză și de condițiile umane care urmează să fie simulate cu testul. Cu toate acestea, trebuie luate în considerare unele dificultăți tehnice. De exemplu. Beneficiul expunerii continue în simularea condițiilor de mediu este compensat atât de necesitatea de a furniza apă și hrană animalelor, cât și de necesitatea unor tehnici mai sofisticate (și mai fiabile) de generare și monitorizare a aerosolului și aburului.
Pentru experimentele pe animale, ar trebui utilizat un sistem de inhalare care să permită o viteză dinamică a aerului cu o rată de schimb de aer de cel puțin douăsprezece ori pe oră, pentru a asigura un conținut adecvat de oxigen și o distribuție uniformă a substanței de testat în atmosferă. Camerele de testare pentru control, precum și pentru animalele de testare ar trebui să fie identice în ceea ce privește proiectarea și construcția, pentru a crea condiții comparabile din toate punctele de vedere - cu excepția expunerii la substanța de testat.
O ușoară presiune negativă este de obicei generată în camera de testare pentru a preveni scurgerea substanței de testat din cameră. Camerele de testare trebuie să se asigure că animalele de testare sunt strânse împreună cât mai puțin posibil. Pentru a asigura stabilitatea atmosferei în camera de inhalare, volumul total al animalelor testate nu trebuie să depășească 5% din volumul camerei.
Trebuie efectuate următoarele măsurători sau controale:
În timpul observării zilnice a animalelor, trebuie acordată o atenție deosebită modificărilor pielii, blănii, ochilor, membranelor mucoase, a sistemului respirator și circulator, a sistemului nervos autonom și central, precum și a modelelor somatomotorii și comportamentale.
Este necesară observarea regulată a animalelor pentru a se asigura, pe cât posibil, că numărul animalelor nu scade în timpul studiului din cauza canibalismului, a autolizei țesuturilor sau a greșelilor în mișcarea animalelor. Animalele moribunde ar trebui să fie identificate, ucise și disecate.
Simptomele clinice și mortalitatea trebuie înregistrate pentru fiecare animal. Dezvoltarea tumorilor trebuie urmată cu o atenție deosebită, trebuie înregistrat timpul de formare, localizarea, amploarea, aspectul și progresia fiecărei tumori clar vizibile sau palpabile.
Aportul de alimente (și consumul de apă, dacă substanța testată este administrată împreună cu apa de băut) trebuie determinat săptămânal pentru primele 13 săptămâni ale studiului și apoi la intervale de trei luni, cu excepția cazului în care sănătatea animalelor sau greutatea corporală necesită alte măsuri.
Greutatea corporală a fiecărui animal trebuie înregistrată o dată pe săptămână în primele treisprezece săptămâni ale testului și cel puțin o dată la patru săptămâni după aceea.
Dacă observarea animalelor sugerează o deteriorare a stării de sănătate în cursul studiului, trebuie efectuată o hemogramă diferențială a animalelor bolnave.
După 12 luni, 18 luni și înainte de sacrificiu, se prepară un frotiu de sânge de la toate animalele. O hemogramă diferențială este luată de la animalele din cea mai mare doză de grup și din grupul de control. Dacă rezultatele din acest lucru, dar mai ales din ultima analiză efectuată înainte de ucidere, sau datele din examinările patologice sugerează acest lucru, ar trebui să se facă și un număr diferit de sânge pentru următorul (grupurile) inferior (e).
O autopsie completă se efectuează pe toate animalele, inclusiv pe cele care au murit în timpul experimentului sau au fost ucise din motive de boală. Toate tumorile sau țesuturile recunoscute cu modificări suspecte trebuie păstrate.
Următoarele organe și țesuturi trebuie păstrate într-un mediu adecvat pentru orice examinare histopatologică ulterioară: toate modificările vizibile, creierul - inclusiv secțiunile de țesut ale medulei/ponsului, cortexului cerebelos și cerebral, glanda pituitară, tiroida/paratiroida, țesutul timusului, traheea și plămânii, inima, Aorta, glandele salivare, ficatul, splina, rinichii, glandele suprarenale, pancreasul, gonadele, uterul, alte organe genitale, pielea, esofagul, stomacul, duodenul, jejunul, ileumul, cecul, colonul, rectul, vezica urinară, ganglionii limfatici reprezentativi, glanda mamară feminină, mușchii coapsei, Nervii sistemului periferic, sternul cu măduvă osoasă, femur - inclusiv suprafața articulației, coloana vertebrală, gâtul, regiunea toracică și lombară, ochii.
Instilarea plămânilor și a vezicii urinare cu soluție de fixare reprezintă conservarea optimă a acestor țesuturi; În studiile de inhalare, o astfel de metodă de fixare a plămânilor este o condiție prealabilă pentru un examen histopachologic optim. În studiile de inhalare, întregul tract respirator, inclusiv nasul, faringele și laringele, trebuie păstrate.
- Organele tuturor animalelor care mor sau sunt ucise în timpul testului, precum și toate animalele din grupurile martor și grupurile cu doză mare sunt supuse unui examen histopatologic complet;
- toate tumorile sau modificările suspecte din toate grupurile;
- Dacă există o diferență semnificativă în frecvența modificărilor neoplazice între cea mai mare doză de grup și grupul de control, organul sau țesutul în cauză ar trebui, de asemenea, să fie supus unui examen histopatologic în celelalte grupuri de doză;
- dacă rata de supraviețuire în grupul cu doză mai mare este semnificativ mai mică decât în grupul de control, următorul grup cu doză mai mică trebuie examinat complet;
- Dacă efectele toxice pot fi demonstrate în grupul cu doza cea mai mare, care poate avea o influență asupra dezvoltării tumorii, următorul grup cu doză mai mică trebuie investigat pe deplin.
B.32. 2. Date
Datele trebuie rezumate sub formă de tabel. Aceasta trebuie să prezinte următoarele informații pentru fiecare grup de testare: numărul de animale la începutul testului, numărul de animale cu tumori detectate în timpul testului, timpul de detectare și numărul de animale la care a fost detectată o tumoare după autopsie. Rezultatele urmează să fie evaluate utilizând o metodă statistică adecvată. Pentru aceasta poate fi utilizată o metodă statistică recunoscută.
B.32. 3. Raport final
B.32. 3.1. raport
Dacă este posibil, în raportul de testare trebuie precizate următoarele:
- Specii de animale, tulpină de animale, origine. Condiții de adăpostire, hrănire.
- Condiții de test:
Descrierea aparatului de expunere
inclusiv proiectarea, tipul, dimensiunile, sursa de aer, sistemul pentru generarea de particule și aerosoli, sistemul de aer condiționat, tratarea aerului evacuat și tipul de acomodare a animalelor în camera de testare în timpul executării testelor. Dispozitivele pentru măsurarea temperaturii, umidității și, dacă este cazul, a stabilității concentrației de aerosoli sau a dimensiunii particulelor trebuie descrise.
Aceste date trebuie rezumate sub formă de tabel, indicând valorile medii și luând în considerare fluctuațiile (de exemplu, abaterea standard). Acestea trebuie să conțină următoarele informații:
B.32. 3.2. interpretare
Vezi introducerea generală partea B; G
B.32. 4. Literatura
Vezi introducerea generală partea B; H
mediu-online - versiune demo
Toate complet Texte în versiunea curentă în abonamentul anual
Taxă de utilizare: 90.- € net (licență de bază)
(în prezent, aproximativ 7200 de titluri vezi prezentarea generală - nu există diviziuni în domenii)
Prețuri și comandă
Codul de acces este transmis cu scurt timp