Investigarea inflamației intestinale în modelul protocolului IBD indus de DSS (tradus în franceză)

rezumat

Modelele experimentale ale bolii inflamatorii intestinale ne-au permis să examinăm complexul înnăscut și adaptativ al răspunsurilor imune asociate cu patogeneza. Folosind scorul histologic, cuantificarea citokinelor pro-inflamatorii și activitatea mieloperoxidazei, se poate începe evaluarea acestor răspunsuri observate în boala inflamatorie intestinală.

Abstract

Boala inflamatorie intestinală (IBD) cuprinde o serie de patologii intestinale, dintre care cele mai frecvente sunt colita ulcerativă (UC) și boala Crohn (CD). Atât UC cât și CD, atunci când sunt prezente în colon, generează un profil de simptome similare care pot include diaree, sângerări rectale, dureri abdominale și pierderea în greutate. 1 Deși patogeneza IBD rămâne necunoscută, este descrisă ca o boală multifactorială care implică atât componente genetice, cât și componente de mediu. 2

Există multe modele animale și variabile ale inflamației colonului care seamănă cu mai multe caracteristici ale IBD. Modelele animale de colită variază de la cele care apar spontan în tulpini sensibile ale anumitor specii la cele care necesită administrarea de concentrații specifice de substanțe chimice care induc colita, cum ar fi sulfatul de dextran de sodiu (DSS). Modelele de inflamație intestinală induse chimic sunt cele mai frecvent utilizate și cele mai bine descrise modele de IBD. Administrarea DSS în apa potabilă produce colită acută sau cronică, în funcție de protocolul de administrare. 3 animale care au primit SSD prezintă pierderea în greutate și semne de scaune libere sau diaree, uneori cu dovezi de sângerare rectală 4,5. Aici, descriem metodele prin care dezvoltarea colitei și răspunsul inflamator rezultat pot fi caracterizate după administrarea DSS. Aceste metode includ analiza histologică a secțiunilor de colon colorate cu hematoxilină/eozină, măsurarea citokinelor pro-inflamatorii și determinarea mieloperoxidazei (MPO), care poate fi utilizată ca marker pentru inflamație. 6

Amploarea răspunsului inflamator în starea de boală poate fi evaluată prin prezența simptomelor clinice sau prin modificarea histologiei în țesutul mucos. Daunele histologice ale colonului sunt evaluate folosind un sistem de notare care ia în considerare pierderea arhitecturii criptei, infiltrarea celulelor inflamatorii, îngroșarea mușchilor, epuizarea celulelor calice și cripta. 7 Cantitativ, nivelurile de citokine proinflamatorii acute cu proprietăți inflamatorii, cum ar fi interleukina (IL) -1β, IL-6 și factorul de necroză tumorală (TNF) -α, pot fi determinate folosind metodele ELISA clasice. În plus, activitatea MPO poate fi măsurată folosind un test colorimetric și utilizată ca indice de inflamație. 8

În colita experimentală, severitatea bolii se corelează adesea cu activitatea crescută a MPO și cu niveluri ridicate de citokine pro-inflamatorii. Severitatea colitei și inflamației asociate cu leziuni pot fi evaluate prin examinarea consistenței scaunului și a sângerării, pe lângă evaluarea stării histopatologice a intestinului utilizând secțiuni de colon tisular colorate cu hematoxilină/eozină. Fragmentele de țesut de colon pot fi utilizate pentru a determina activitatea MPO și producția de citokine. Luate împreună, aceste măsurători pot fi utilizate pentru a evalua răspunsul inflamator la modelele animale de colită experimentală.

Protocol

1. Modelul șoarecelui de colită acută indusă de DSS

2. Se colectează probe de țesut din colon

3. Evaluarea severității colitei

4. Pregătiți soluții standard de reactivi pentru testare.

  1. Se prepară o soluție de 50 mM tampon fosfat de potasiu prin adăugarea soluției B (K 2 HPO 4, 8,7 g fosfat dibasic de potasiu în 1 L de dH 2 O) la soluția A (KH 2 PO 4, 6, 8 g fosfat de potasiu monobazic în 1L de DH20) până când se atinge un pH de 6,0. Soluțiile rămase pot fi păstrate la frigider (2-8 ° C) până la utilizare ulterioară.
  2. Se prepară tampoane de bromură de hexadecil (CCFH) adăugând 5 g HTAB în 1 L tampon fosfat de potasiu (50 mM, pH = 6,0). Se încălzește ușor pentru a se dizolva și se păstrează la 2-8 ° C până la utilizare. Când este necesar, încălziți pentru a dizolva din nou.
  3. Pregătiți un tampon de liză pentru omogenizarea țesutului pentru analiza proteinelor adăugând 10 ml de acid clorhidric Tris-1M (pH = 8,0), 6 ml de clorură de sodiu 5M și 2 ml de Triton X-100 până la 182 ml de apă distilată sterilizată. Triton X-100 este foarte vâscos la temperatura camerei și, prin urmare, trebuie încălzit ușor înainte de utilizare. Tamponul de liză preparat poate fi depozitat la -20 ° C până la utilizare.