Raport practic Separarea lactozei și proteinelor din lapte - Foaie - ptitbou
De ptitbou • 8 noiembrie 2015 • Foaie • 1.386 cuvinte (6 pagini) • 3.402 vizualizări
G.M Group TD 1.6
Raport TP III Separarea lactozei și a proteinelor din lapte
Laptele, un produs de origine animală, conține trei tipuri de constituenți: proteine, carbohidrați și lipide.
Proteinele din lapte sunt reprezentate în principal de cazeine (masa moleculară de aproximativ 35 kDa = 35.000 g.mol -1).
Există, de asemenea, lactoză (sau β-D-galactopiranozil (1 → 4) D-glucopiranoză) care este o dizaharidă și, prin urmare, are o masă moleculară (342 Da) semnificativ mai mică decât cea a cazeinelor care, fiind polipeptide, sunt secvențe de d 'amino acizi care reprezintă fiecare aproximativ 110 Da.
II- Obiectivul manipulării
În această manipulare, ni s-a propus să studiem ordinea de eluare a diferiților constituenți ai laptelui mai întâi de toate, separându-i unul de celălalt prin cromatografie de excludere, apoi să detectăm prezența lor în diferitele noastre fracțiuni prin spectrofotometrie. Pentru proteine și prin reacție cu lichiorul lui Fehling pentru os.
III- Principiul tehnicilor utilizate
În această parte vom prezenta principiile diferitelor tehnici de studiu utilizate în timpul manipulării.
Tehnica filtrării cu gel sau cromatografia de excludere
Această metodă de separare va face posibilă eluarea diferiților constituenți ai probei, introduși în coloana de cromatografie, în funcție de mărimea lor și, prin urmare, de masa moleculară a acestora.
De fapt, gelul utilizat în această metodă de filtrare (aici Sephalex G-25) nu va interacționa prin afinitate chimică cu macromoleculele noastre de interes (ca în cromatografia de afinitate), ci le va permite să fie separate, deoarece mărgelele care alcătuiesc un rețea dimensională pe care doar moleculele cu masă moleculară mică le pot pătrunde. Ei își vor vedea astfel timpul de ședere în coloană extins în comparație cu macromoleculele cu masă moleculară ridicată pe care nu le vor introduce între microbere și vor eluda fără întârziere. Moleculele mari, complet excluse din gel, vor fi eluate cu un volum de solvent egal cu V 0 (numit volum mort, corespunde unei treimi din volumul total al coloanei) în timp ce cele cu masă moleculară mai mică, care vor circula pentru un timp mai lung în coloană, va ieși cu un volum mai mare de tampon, egal cu V e = V 0 + K d V i cu K d care este o constantă specifică fiecărei molecule și care variază invers proporțional cu logaritmul moleculei masa moleculei luate în considerare.