Testele in vitro asupra acțiunii furazolidonei, hostaciclinei, cloramfenicolului și
Documente
De la Institutul Federal de Cercetare pentru Creșterea Animalelor Mici, Celle
Experimente in vitro cu privire la efectele furazolidonei, hostacy clin, cloramfenicol
și dihidrostreptomicină pe Salmonella pullorum
În 1954 COSGKOVE; GRUMBLES și personal; HARWOOD și STUNZ, precum și SMITH au subliniat adecvarea furazolidonei pentru tratamentul infecției cu Salmonella pullorurn la păsări de curte. SMITH (1954b), WILSON (1956), TITKEMEYER și SCHMITTLE (1957), BELDINC și MAYER (1958) au constatat în studiile comparative că furazolidona este superioară sulfonamidelor și antibioticelor utilizate anterior în ceea ce privește efectul tratamentului. Dar chiar și cu acest preparat nu este posibil să se excludă complet purtătorii de germeni latenți printre animalele sănătoase din punct de vedere clinic, așa cum arată numeroase studii: [SMITH (1954b și 1955); GORDON și TUCKER (1955); HARBOR and SELLER (1955); LUCAS (1955); WILSON (1955 & 1956); GYLSTORPF și DORN (1956); HARBOR (1956); SMYSER și VAN ROCKEL (1957); AYACARDI (1958); BELDING și MAYER (1958); HENDERSON și colab. (1958) l.
Aceste afirmații se bazează în principal pe experimente pe animale. Experimente in vitro asupra acțiunii furazolidonei asupra soluției saline. microbii pullorum au fost folosiți doar într-o măsură limitată. Autorii în cauză s-au preocupat în primul rând de determinarea dozelor necesare unei terapii promițătoare [YUKCHENCO și YURCHENCO (1953); SMITH (1954 a și b); ROGERS și colegi (1956) l. În plus, următoarele întrebări sunt de interes, a căror clarificare poate ajuta la evaluarea adecvării unui preparat pentru terapie:
I. Se pot aștepta tulpini bacteriene rezistente în practică? 2. Sunt esențiale pentru a fi luate în considerare în doza terapeutică
Detectați diferențele de sensibilitate între diferite tulpini?
3. Preparatul are efect bacteriostatic sau bactericid?
Efectul furazolidonei, hostaciclinei etc. asupra Salmonella pullorum 95
4. În ce măsură poate fi provocată rezistența la medicamente în germenii pullorum și este apoi reversibilă sau permanentă?
5. Cu doze mici pe termen lung de preparat, apare o stimulare a creșterii germenilor?
6. Germenii care au devenit rezistenți își pierd și ei sensibilitatea la alte preparate (rezistență încrucișată)? Experimente in vitro mai extinse ar trebui să ofere un răspuns la acest lucru
Se găsesc întrebări. Pe lângă furazolidonă, am inclus în investigațiile noastre un reprezentant al grupului de tetraciclină (hostaciclină), precum și cloramfenicol și streptomicină.
Un total de 24 de tulpini de colectare, care fuseseră izolate de depuneri de diferite origini între 1955 și 1957 și identificate ca Salmonella pullorurn, au fost utilizate pentru teste. Tulpina trebuie înțeleasă ca însemnând germeni uniformi genetic care au apărut dintr-o colonie stocată individual (pentru tulpini unice am presupus două colonii separate, care sunt apoi desemnate ca a și b).
Toate experimentele în care trebuiau determinate concentrațiile eficiente ale preparatului au fost efectuate cu ajutorul diluării tubului, pe care l-am setat în puteri de două. Valorile date se referă la 1 ml și s-au bazat pe următoarele doze, care nu au fost niciodată utilizate mai mult de 24 de ore: 1. Furazolidonă 0,01 g cu 4 ml de dimetilformamidă ') ca solubilizant
(Furoxon Boehringer, Mannheim) în 96 ml soluție nutritivă = 100 ylml 2. Tetraciclină 0, ulei g
(Hostacyclin Hoechst) în 100 ml soluție nutritivă = 100 ylml 3. Cloramfenicol O, OI g
(Boehringer, Mannheim) în 100 ml soluție nutritivă = 100 μg/ml 4. Dihidrostreptomicină sulfat 0,1 g
(Bayer, Leverkusen) în 100 ml soluție nutritivă = 1000 y/ml Soluția nutritivă utilizată a constat din:
1,8 g Vitam Bakt. 1,0 g dextroză 0,5 g peptonă 0,3 g NaCI O, 2 g sec. Fosfat de sodiu 0,1 ml albastru de bromotimol (1,6% alcool.)
ca indicator de culoare în 100 ml apă distilată. Ajustat la pH 7,2 cu NaOH.
Sămânțarea germenilor în fiecare tub a fost efectuată uniform cu o picătură dintr-o pipetă de 1 ml din culturi de bulion de 6 ore care fuseseră inoculate cu o substanță. Creșterea germenilor sau inhibarea germenilor au fost citite din schimbarea culorii după 24 de ore de peeling. Subțierea la care nu s-a produs nicio modificare a culorii în cele trei rânduri de diluare paralele a fost considerată valoarea de inhibare.
Din toate diluțiile, s-au făcut frotiuri pe sol endo și agar pentru a verifica puritatea culturilor o dată și pentru
I) Dimetilformamida are un efect inhibitor asupra creșterii bacteriene până la o diluție de 1: 100. În prezentul aranjament de testare, această concentrație scade sub 2-3 (0,5 O/o dimetilformamidă).
alții să poată decide dacă și până la ce concentrație a preparatului a fost prezent un efect bactericid sau numai bacteriostatic.
Trei tulpini (Nr. 11, 12 și tulpina nou izolată 99) au fost utilizate pentru a provoca rezistență. Bacteriile au fost cultivate în concentrația preparatului care a permis doar multiplicarea germenilor și în concentrații mai mari. Dacă germenii au crescut bine în timpul pasajelor de 24 de ore, diluțiile corespunzătoare mai mici au fost utilizate pentru reproducere ulterioară. Pentru aceste experimente, furazolidona a fost lăsată să fie dizolvată numai în 0,4 ml de dimetilformamidă. Trebuie acceptată o soluție incompletă a preparatului (vezi F u h o t e 1).
Controalele de creștere ale pasajelor de provocare, care au fost stabilite cu bacteriile care deveniseră rezistente, au arătat dacă se produce un obicei în sensul stimulării creșterii.
După 30 de pasaje de provocare (dihidrostreptomicină 8 pasaje), germenii au fost alimentați într-o soluție nutritivă simplă la fiecare 24 de ore pentru alte 30 de pasaje și sensibilitatea lor la preparat a fost testată din când în când în testul de subțiere a tubului.
Germenii care deveniseră insensibili la un preparat au fost testați pentru rezistență încrucișată cu celelalte preparate.
Tabelul 1 prezintă concentrațiile inhibitoare de furazolidonă, hostaciclină, cloramfenicol și dihidrostreptomicină determinate in vitro pentru 24 de somoni testați. tulpini pullorurn indicate. Tabelul prezintă, de asemenea, concentrațiile la care preparatele au avut un efect bactericid.
Tulpini de Salm rezistente în principal. pullorum nu a putut fi găsit în niciun caz. În contrast, au existat diferențe de sensibilitate între tulpinile individuale pentru hostaciclină, cloramfenicol și streptomicină, cele 3 niveluri de diluare și 4 pentru furazolidonă, 4 niveluri de diluare. Exprimată în unități de greutate per ml de mediu nutritiv, sensibilitatea la furazolidonă a variat între 6,25 y și 0,39 y; cu hostaciclină și cloramfenicol între 0,78 y și 0,095 y și cu dihidrostreptomicină între 250 y și 3 1,25 y.
Hostaciclina a avut cele mai bune valori inhibitoare - urmată îndeaproape de cloramfenicol. Furazolidona trebuia administrată în medie de aproape zece ori și dihidrostreptomicina de 300 de ori mai mare pentru a obține același efect inhibitor in vitro. Dar chiar și o doză de hostaciclină de 100 ylml (2 4 = cea mai mare concentrație testată) a dus doar la bacteriostază; pentru bacteriile capabile de reproducere ar putea fi ușor detectate din subțiri, în care nu a fost indicată o creștere a germenilor printr-o schimbare de culoare. În cazul cloramfenicolului, 5 0 y și 2 5;
/ d pentru a determina un efect bactericid. Furazolidona și streptomicina au avut un efect bactericid (furazolidona 12,5 7; dihidrostreptomicină 250 7) chiar și atunci când concentrația a fost crescută de două sau patru ori, măsurată prin dozele necesare pentru inhibarea germenilor. Gama largă dintre concentrațiile inhibitoare și concentrațiile cu proprietăți bactericide cu cloramfenicol și în special cu hostaciclină a devenit evidentă atunci când seriile de diluție au fost evaluate prin tranziții mai mult sau mai puțin fluide în schimbarea culorii, în timp ce indicația culorii pentru dihidrostreptomicină și Furazolidona brusc desenată.
Expunerea la furazolidonă, hostaciclină etc. 3uf Salmonella pullorum 97
T a b e l l e I H e m m e r t e u n d K o n z e n t r a t i o n m i t b a k t e r i z i d e r W i r k u n g v o n F u r a z o l i d o n, H o s t a c y c l i n, C h l o r a m p h e n i c o l -
s t r e p t o m y c i n g e g e n i i b e r 2 4 S a l m. p u l l o r u m - S t a r n m e n
Furazolidon Hostacyclin Chlor- Dihydro- amphenicol streptomycin l) tulpina Wacfis- ceara de avertizare-
inhiba. inhiba. inhiba. hemrng. turn- bactericide turn- bactericide tum- bactericide tum- bacterizi,