Panserin C6000, mediu fără proteine pentru celule CHO în suspensie, cu L-glutamină
- Acasă/->
- Panserin C6000, mediu fără proteine pentru celule CHO în suspensie, w: L-glutamină
- Utilizați celule din cultura aderentă care conține ser (de exemplu, glicemie ridicată DMEM cu 10% FCS) din faza log.
- Îndepărtați mediul care conține serul cu o pipetă.
- Se spală peluza cu celule cu PBS fără Ca, Mg.
- Acoperiți peluza celulară cu tripsină/EDTA (0,25%, 0,02%) (aproximativ 2 ml pe o sticlă T25).
- Scoateți tripsina după aproximativ 1 min.
- Incubați până când celulele se rotunjesc și se detașează de substrat. (după aproximativ 5 minute).
- Absoarbe celulele din DMEM, oprește activitatea rămasă a tripsinei cu 10% FCS.
- Centrifugați celulele, luați în PBS și centrifugați din nou.
- Luați celule în PBS și determinați numărul de celule. Semănați 5 x 104 - 1 x 105 celule/ml în Panserin C6000 preîncălzit.
- Utilizați sticle de cultură pentru cultura în suspensie (de exemplu, greiner bio-one, cod 690 190).
- Incubație la 37 ° C și 5% gaz de CO2 în incubator.
O fază de întârziere apare în primele câteva zile, cu aproape nicio multiplicare celulară. Cu toate acestea, după aproximativ 7 zile, celulele s-au obișnuit cu mediul fără proteine și au crescut la 1 × 106 celule/ml.
Transferați celulele în mediu proaspăt la fiecare 3-4 zile.
Sămânță 3 - 5 x 104 celule/ml.
Timp de generație CHO în Panserin C6000: 16,5 h.