Depășirea degradării ADN-ului în știința criminalistică; Știri-Medical
Disclaimer: Această pagină este o traducere automată a acestei pagini inițial în engleză. Vă rugăm să rețineți, deoarece traducerile sunt generate automat, nu toate traducerile vor fi perfecte. Acest site web și paginile sale web sunt destinate citirii în limba engleză. Orice traducere a acestui site și a paginilor sale web poate fi inexactă și inexactă, în totalitate sau parțial. Această traducere este furnizată într-o practică.
Probele legale care au fost deteriorate sau distruse în mod intenționat trebuie reparate pentru analiză și utilizare în instanță. Există mai multe metode care pot repara aceste daune.
Pinhead Studio | Shutterstock
Moartea celulară și degradarea ADN-ului
Moartea celulară activează diferite enzime intracelulare, cum ar fi lipazele, proteazele și nucleazele. Lizozomii, care conțin enzime hidrolitice, pot descompune biomoleculele precum proteinele histonice. La rândul său, demontarea proteinelor histonice facilitează acțiunea endonucleazelor care pot scinda ADN-ul.
Nucleazele eliberate de microorganisme în mediu degradează în continuare fragmentele de ADN și o creștere a calciului citosolic liber activează fosfolipazele care degradează membrana și duc la eliberarea unor enzime mai degradante. Deci, deteriorarea ADN-ului răspândit este moartea iminentă a hergheliei.
PCR amplificând ADN-ul degradat
Problemele legate de PCR ale ADN-ului degradat pot fi atribuite a trei probleme: eșecul amplificării, amplificarea preferențială și leziunile de codificare greșită. Pentru a identifica secvențe scurte de repetare în tandem (STR) în ADN necesită cel puțin 1 ADN NG și 28-30 de cicluri de amplificare.
Amplificarea poate fi îmbunătățită prin adăugarea de polimerază Taq și cicluri suplimentare de PCR. În cazul probelor degradate, ampliconii mai scurți pot fi amplificați mai frecvent, deoarece ampliconii mai lungi sunt degradați. Aceasta este denumită amplificare preferențială. Pentru a depăși această problemă, pot fi utilizate tehnologii moi, cum ar fi perioada de spectrometrie de masă de zbor sau separarea microfanală electroforetică.
ADN mitocondrial (ADNmt)
Analiza ADN-ului mitocondrial (ADNmt) a fost considerată o strategie alternativă de identificare a ADN-ului genomic. Acest ADN circular este prezent în citoplasma mitocondriilor și mai multe copii ale ADNmt pot fi prezente în mitocondrii.
Majoritatea celulelor de mamifere pot avea 200-1700 de copii de ADNmt, ceea ce îl face foarte util pentru investigațiile asupra grupurilor degradate de ADN la om - în special pentru rămășițele scheletice, inclusiv oasele, dinții și unghiile.
Îmbunătățiri ale metodelor pre-PCR și PCR
Pentru eșantioanele cu numărul de copii mai mic, se efectuează extracții și amplificări repetate pentru a reduce erorile. Alte metode includ reducerea volumului PCR, creșterea numărului de cicluri PCR, PCR imbricat, amplificarea întregului genom înainte de PCR, îndepărtarea ionilor după operația de amplificare sau creșterea perioadei de injecție PCR în timpul procesului de electroforeză capilară. O altă strategie crește, de asemenea, concentrația primerului. Pentru a identifica persoanele dispărute sau rămășițele umane, tastați un număr mai mic de copie care poate fi executat.