Detectarea serică a IgE d-specifică; alergeni - Swiss Medical Review
rezumat
Contextul clinic definește mai multe utilizări pentru metode specifice de detectare a IgE. În contextul medicinei de îngrijire primară, analizele rapide care pot fi efectuate în apropierea pacientului își au locul ca alternativă la testele cutanate. Pentru practica obișnuită în cabinetul medicului, sunt preferate metodele cantitative de screening pentru atopie (Phadiatop sau echivalent). Valoarea lor predictivă negativă este utilă în excluderea atopiei. În plus, distincția dintre o alergie sezonieră și perenă este ușoară.
Pentru utilizare de specialitate, rezultatele cantitative ale IgE specifice pot fi legate de probabilitatea unei reacții clinice la un alergen. Au fost stabilite puncte de decizie clinică pentru mai mulți alergeni alimentari obișnuiți asociați cu eczema atopică la copii.
Introducere
Algoritmul de diagnostic pentru confirmarea unei alergii mediată de IgE începe cu istoricul și observarea implicării organelor țintă ale bolii. Asocierea simptomelor alergice cu expunerea la factori externi (de exemplu polen, păr de pisică) întărește prezumția de cauzalitate. Sensibilizarea la alergeni suspectați este confirmată de testarea in vivo a pielii sau testarea serică pentru IgE specific alergenului. Cu toate acestea, diferitele tehnici de detectare a IgE specifice alergenului nu au aceleași caracteristici.
Testul cutanat „Prick” este standardul recunoscut pentru demonstrarea reacțiilor imediate de hipersensibilitate legate de un alergen comun. Datorită rezultatelor sale disponibile rapid, testul cutanat este instrumentul ales de alergolog. Legătura cauzală dintre simptome și alergenul suspectat poate fi stabilită mai formal prin teste de provocare, dacă este necesar.
Indicațiile recunoscute pentru detectarea serică a IgE specifice sunt rezumate în Tabelul 1. 1 Aceste metode in vitro prezintă numeroase avantaje: cuantificare precisă, siguranță absolută, absența interferenței medicamentului și posibilitatea stocării probelor pentru analize ulterioare. Multe tehnologii pot fi utilizate pentru a căuta acești anticorpi specifici, dar proprietățile lor diferă.
Metode de detectare a alergenilor IgE specifici
Încă din 1967, tehnica radioimunologică (RIA) a permis identificarea „reaginului” ca IgE specifică pentru alergeni. 2 IgE monoclonal uman, purificat din mielom IgE, a fost utilizat pentru a produce anticorpi policlonali specifici pentru lanțul greu e. În metoda inițială de utilizare clinică (PhadebasRAST), alergenii au fost fixați pe discuri de celuloză activate și au permis exprimarea semicantitativă a rezultatelor pe baza unei curbe de calibrare stabilite cu IgE specifice polenului de mesteacăn. O cantitate relativă de IgE serică legată de alergen a fost interpolată pe baza intensității legării anti-IgE. Un sistem de punctare semicantitativ de șase clase a fost stabilit și este încă în uz astăzi. Utilizarea acestuia ar trebui însă abandonată în favoarea valorilor cantitative în kIU/l. 3
Îmbunătățirea treptată a diferitelor aspecte metodologice a dus la metode de referință actuale care sunt cantitative, calibrate pe același standard internațional 4 și cel mai adesea automatizate.
Principalele evoluții tehnice sunt următoarele.
Alergeni și legare la suport
Utilizarea alergenilor în fază solidă (alergosorbent) sau în fază lichidă conferă proprietăți de legare diferite de IgE, în special în ceea ce privește specificitatea și afinitatea. Posibilitatea de a lucra în exces de alergeni minimizează aceste efecte, motiv pentru care capacitățile de legare ale alergenilor pe un suport au devenit decisive în asigurarea unei bune sensibilități a acestor tehnici. Unul dintre progresele majore este dezvoltarea unui polimer încapsulat într-o matrice hidrofobă care permite legarea covalentă a unor cantități mari de alergeni. Acest polimer, numit sistemul Pharmacia CAP, a îmbunătățit sensibilitatea și specificitatea detectării IgE specifice. Numeroasele studii clinice efectuate în aceleași condiții îl fac astăzi o metodă de referință.
Pornind de la diferite proprietăți tehnice, alte metode au avut o dezvoltare paralelă. Diagnostic Products Corporation (DPC) a ales să lucreze în faza solubilă cu alergeni marcați cu biotină. Reacția alergen/anticorp IgE a serului pacientului are loc în faza lichidă, apoi este imobilizată pe un suport format din margele acoperite cu streptavidină. Coerența rezultatelor obținute prin această tehnică (Immulite) în comparație cu UNICAP este acceptabilă. De exemplu, este> 80% pentru detectarea IgE specifice împotriva alimentelor. 2
Standardizarea alergenilor și comparațiile cu datele clinice sunt însă realizate doar parțial. Într-adevăr, natura complexă a extractelor alergenice constituie o provocare majoră pentru optimizarea metodelor de detectare a alergenilor IgE specifici. Identificarea alergenilor majori în rândul grupurilor de pacienți alergici durează uneori ani. În plus, acești alergeni pot varia în special între țări. Proprietățile fiecărui alergen recombinant trebuie comparate individual cu alergenii naturali la pacienții alergici, așa cum a fost cazul alunelor. 6 Această lucrare minuțioasă este în curs de desfășurare pentru mulți alergeni.
Îmbunătățirea metodelor de detectare a IgE specifice pentru latex este o ilustrare recentă a contribuției și importanței alergenilor recombinați pentru diagnosticul clinic. Într-adevăr, alergenul major al latexului natural, Hevea brasiliensis 5 (Hev b5) este o proteină acidă, labilă și modificată în timpul extracției și fixării pe suportul matricei. 7 Adăugarea proteinei recombinante Hev b5 la extractul natural fixat (spiking) pe matrice a permis un câștig de sensibilitate de 10%, fără reducerea specificității. 8 Utilizarea clinică a IgE specifice împotriva proteinelor polenice recombinante este, de asemenea, o mare promisiune pentru o mai bună previziune a răspunsului la tratamentele cu imunoterapie.
O a doua linie de dezvoltare implică fixarea alergenilor individualizați pe același suport, apoi semnalul este cuantificat și extrapolat în rezultate semicantitative pentru fiecare dintre alergeni. Aceste tehnici sunt utilizate pentru analiza pe benzi. Acestea prezintă dificultăți în standardizare și reproductibilitate pentru anumiți alergeni.
Mai recent, cipurile microarray au permis dezvoltarea de noi metode folosind pete de proteine alergenice legate de o matrice de silice activată. 9 Utilizarea unor cantități minime de proteine (de exemplu, 10nL/spot) în această tehnică robotică permite teoretic detectarea IgE specifice împotriva unei multitudini de proteine individuale folosind puțin ser. Cuantificarea semnalului diferitelor pete se realizează prin spectrofluorometrie. Performanțele actuale ale acestor metode prezintă dezavantaje care nu justifică utilizarea clinică pentru moment.