Hidroliza enzimatică a proteinei de cartof coagulate la căldură 2

Documente

Transcrierea hidrolizei enzimatice a proteinei de cartof coagulate cu căldură partea 2. Parametrii de influență

Hidroliza enzimatică a proteinei de cartof coagulate la căldură Partea 2. Parametrii de influență *

De F. Mittelbach, E. Berghofer, W. Steyrer și W. Hein, Viena

Pentru succesul hidrolizei enzimatice a căldurii coagulate Hidrolizei enzimatice a căldurii proteine ​​de cartof coagulate. II.Produse proteice din cartof, este esențial să avem influența parametrilor care determină reacția. Pentru a reduce sau opri unii parametri de testare a substanțelor inhibitoare. Acest lucru se poate face prin selectarea preparatelor enzimatice adecvate sau utilizând hidroliza enzimatică investigată a proteinei de cartof coagulate la căldură. Reducerea și eliminarea, respectiv, a influenței anumitor metode de pre-tratament. inhibitori asemănători proteinelor prin selecția enzimelor specifice sau prin

aplicarea metodelor de pretratare broper a avut o importanță majoră.

Proteina din cartof obținută prin coagulare presiune-căldură este în mare parte insolubilă [1, 2, 31. Hidroliza enzimatică este una dintre posibilitățile de îmbunătățire a solubilității și a altor proprietăți funcționale conexe [4]. În continuarea lucrării deja raportate pe scurt [5], au fost examinați diferiți factori de influență în defalcarea enzimatică a proteinelor din cartof.

Produsul uscat din proteine ​​din cartof din diferiți ani de recoltare a fost produs prin coagulare presiune-căldură și uscare în circulație:

Conținut de proteine ​​brute Conținut de apă Conținut de cenușă brută (N x 6,25)

1974 78,3% 9,7% 3,4% 1975 77,9% 7,8% 3,0% 1976 8O, O% 8,2% 2,7% 1971 75,2% 6,7% 3, 0% I978 79,2% 7,6% 2,8%

Coagulatul umed de proteine ​​din cartof din 1978 a fost produs prin coagulare presiune-căldură și conservat prin congelare până când a fost utilizat:

Conținut de proteine ​​brute Conținut de apă Conținut de cenușă brută (N x 6,25)

Preparate comerciale de diferite origini.

Interval de pH 5,9 -8,0: Tampon fosfat verde cu tărie ionică I = 0,2:

PH 9.2: tampon universal conform Teorell și Stenhugen;

PH 5, o: tampon acetat Boyd, I = 0,2; pH 2,0 sau 2,5: tampon citrat de Na/acid clorhidric.

3 Metode 3.1 Configurare experimentală pentru hidroliza enzimatică

Degradarea enzimatică a fost efectuată în experimente discontinue fie utilizând tampoane, fie conform tehnicii pH-stat. Metodologie la utilizarea soluțiilor tampon: Se cântăresc 5,0 g de substrat într-un balon cu fund rotund de 250 ml cu NS 29/32, se acoperă cu 80 g de tampon, după adăugarea unui agitator magnetic, se închide balonul, se pune într-o baie de apă termostatată de 1 ", Sub care se află un agitator magnetic, introduceți și încălziți la temperatura dorită în decurs de 15 minute. Cântăriți cantitatea necesară de enzimă într-o barcă de cântărit, clătiți enzima în balonul cu fund rotund folosind restul de 15 g de soluție tampon și închideți balonul După timpul specificat de hidroliză, terminați reacția plasând balonul într-o baie de apă clocotită timp de 20 de minute. Răciți balonul la temperatura camerei sub apă curentă. Efectuați un test gol pentru fiecare serie fără adăugarea de enzime. 7] așa cum este descris .

3.2 Urmărirea degradării proteinelor

În acest scop, s-a utilizat în principal determinarea fracției de proteină solubilă (proteină solubilă pe baza proteinei brute totale) și, în cazul tehnicii pH stat, s-a folosit calculul gradului de hidroliză din consumul caustic [8], care, totuși, se aplică doar valorilor pH-ului 6.5 este posibil.

* Prima parte Starke 32 (1980), 231

Starch/Starke 32 (1980) No. 11, pp. 369-375 aj Verlag Chemie, GmbH, D-6940 Weinheim 1980 0038-9056/80/1111-0369 02,50 $/0

Conținutul de proteină solubilă a fost determinat prin următoarea metodă: Centrifugați suspensia de proteine ​​la aproximativ 40.000 g și 2-4 ° C. timp de 30 de minute. În supernatantul limpede, determinați conținutul de azot conform Kjeldahl în mod obișnuit și multiplicați cu 6,25 pentru a obține solubil Conversia proteinelor crude.

3.3 Producerea apei de fructe din cartofi (FW) pe o scară de laborator Spălați 250 - 500 g cartofi necojiti cu apă de la robinet, apoi clătiți cu apă distilată, uscați cu hârtie de filtru și cântăriți la 0,1 g. Umpleți un vas colector sigilabil (de exemplu, sticlă cilindrică de 500 ml cu capac de răsucire) pentru FW cu 0,17% K2S20, pe baza cantității de cartofi. Procesați cartofii cât mai repede într-un storcător de tip Progress 609K22. Îndepărtați spuma și orice părți ale cojii de pe suprafața FW cu ajutorul unei linguri sau aspirați-o cu un tub de sticlă folosind o pompă cu jet de apă. Centrifugați FW la aproximativ 40.000 g și 2-4 ° C, turnați supernatantul și măsurați volumul. Randamentul de FW galben deschis este de obicei de până la 50% din cantitatea de cartofi utilizată.

3.4 Testarea semicantitativă a efectelor inhibitoare prin difuzie cu gel de agar Un set de probe disponibile în comerț a fost utilizat pentru a produce plăci de gel de agar cu cazeină ca substrat și un pH de 7,2 [9]. Plăcile cu alte valori ale pH-ului au fost preparate în conformitate cu Lowenstein și Ingild [lo]. Determinarea a fost efectuată ca în Takahashi și colab. [Eu eu]. În acest caz, lichidul sau suspensia de testat a fost adăugat în cantități diferite la o serie standard cu, de regulă, patru concentrații de enzime adecvate. Evaluarea semicantitativă a fost efectuată pe plăci necolorate prin măsurarea diferențelor în diametrul respectiv al zonelor radiale cu și fără adăugarea de inhibitori .

4 Rezultate și discuții Tabelul 1 rezumă posibili factori de influență în hidroliza enzimatică a proteinelor din cartof. Experimentele noastre s-au bazat pe produse proteice definite din cartof (a se vedea materialul), astfel încât materia primă-

Tabelul 1 . Influențe posibile în hidroliza enzimatică a proteinelor din cartofi.

Varietate de cartofi Calitatea tuberculilor Condiții de coagulare Puritate de coagulat Condiții de uscare Conținut de inhibitori Pretratarea substratului Prepararea enzimei Raport enzimă/substrat Concentrația substratului Valoarea pH-ului Temperatură foarte ionică Timp de reacție Inhibarea sustratului Inhibarea produsului

și variabilele influenD dependente de proces pot fi presupuse ca fiind constante.

4.1 Compararea diferitelor preparate entimere

4.1 .I Produs uscat proteic din cartof ca substrat Enzimele enumerate în tabelul 2 au fost utilizate la temperatura optimă și valoarea pH-ului specificate de producător, în timp ce raportul E/S, concentrația substratului și timpul de hidroliză au fost menținute constante. Produsul uscat din proteine ​​din cartof 1974 a servit ca substrat de testare și cazeină pentru comparație. Din rezultatele din Tabelul 2 se poate observa că, cu toate enzimele din proteina cartofului, s-ar putea realiza o degradare mai mică și, în majoritatea cazurilor, chiar semnificativ mai mică decât cu cazeina. Cauza pentru aceasta a venit u. A. lipsa posibilităților de atac pentru enzime datorită structurii proteinei din cartof și/sau prezenței sau apariției substanțelor cu efect inhibitor, care a fost investigată în continuare (vezi secțiunile 4.2.2 și 4.3). Ca rezultat al diferitelor activități ale enzimelor utilizate, rezultatele date în tabelul 2 - spre deosebire de valorile din tabelul 3 - nu permit comparații cu privire la eficacitatea preparatelor enzimatice.

Tabelul 2. Degradarea enzimatică a produsului uscat din proteina cartofului 1974 și a cazeinei prin intermediul diferitelor proteaze utilizând soluții tampon (concentrația substratului 5%; E/S 0,02; timp de hidroliză 3 h).

Valoarea pH-ului Conținutul de proteine ​​Tern (X) temperatura cazeinei de cartof

Protează neutră de la Bac. subtilis Carica papaya proteaza Proteaza neutra din Bac. protează alcalină suhtilis din Bac. lichenijormis protează neutră din Bac. subtilis Trypsin Acid Fung Protease din A s p. Saitoi Pepsin Amestec de endo- și exopeptidaze din A s p. oryzae protează alcalină din Bac. subtilis Protează vegetală Protează termofilă din Bac. thermoproteolyticus Rokko, protează neutră purificată din Bar. subtilis Protează fungică neutră din Aspergillus sp. Protează termofilă de la Bac. thermoproreolyticus Rokko

---