Influența hemoxigenazei inductibile (HO-1) asupra microcirculației în
1 De la Clinica Universității Chirurgice, Departamentul de Chirurgie Generală și Viscerală de la Albert-Ludwigs-Universität Freiburg i.br. Influența hemoxigenazei inductibile (HO-1) asupra microcirculației în pancreatita post-ischemică I N A U G U R A L - D I S S E R T A T I O N pentru obținerea diplomei de medic medical de la Facultatea de Medicină a Albert-Ludwigs-Universität Freiburg i.br. Prezentat în 2006 de Moritz Scholtes născut în Aachen
2 2 Decan: Prof. Dr. med. C. Peters 1 recenzor: PD Dr. med. O. Thomusch Recenzorul 2: Prof. Dr. med. B. Defalcări Anul absolvirii: 2007
4 4 Această lucrare a fost supravegheată de Dr. med. E. von Dobschütz
5 5 CUPRINS 1. INTRODUCERE PANCREATITA ACUTĂ MICROCIRCULAȚIE ISCHEMIE REPERFUZIE HEMDEGRADARE DATĂ DE HEMOXIGENAZĂ Procedura de testare de control al condițiilor de activitate ischemie-repemeritis-hemogenase-inhibare-oxigen-inhibare activității de anestezie si ventilatie microchirurgie tehnologie EXAMENUL METODE Macrohemodynamics Microhemodynamics funcțională densitate capilară leucocitară endoteliale parametrii de laborator interacțiune Determinarea detectarea activității HO Northern analiza Western blot analiza blot grupuri EXPERIMENTALĂ PROTOCOL test de ischemie-repaemitis-hemogenase-inhibitoare-oxigenazei-inhibarea activității de ischemie-repaemitis-hemogenase-inhibitoare-oxigenazei-oxigenare a activității inhibarea activității de ischemie-repemeritis-inhibare a inhibării oxigenarea oxigenare. 35
6 6 4. REZULTATE MACROHAEMODINAMICĂ MICROHAEMODINAMICĂ Densitate capilară funcțională Interacțiune leucocit-endotelială PARAMETRI DE LABORATOR DETECȚIA HEMOXIGENAZEI Detecția activității Northern blot Western blot PREZENTARE DISCUȚIE DISCUȚIE DISCUȚIE Northern-Blot REZULTATE Influența ischemiei și reperfuziei Macrohemodinamica Microhemodinamica Interacțiunea leucocit-endotelială Expresia și activitatea hemoxigenazei Influența HO Macrohemodinamica Microhemodinamica Leucocit-interacțiunea endotelială Expresia și activitatea hemoxigenazei REZUMATUL LISTEI LITERULUI. 98
10 10 Aceste mecanisme duc la o tulburare de microcirculație, care la rândul său duce la o reducere a alimentării cu energie a țesutului și astfel menține cercul vicios (Figura 1). Na + -K + - ATPaza Na + -Ca 2+ - Antiport ATP Na + Ca 2+ Proteaze XDh O 2 Hyx + XOx Ischemia Sânge-O 2 Reperfuzie O 2 -permeabilitate radicală Edem Tromboză Coagularea leucocitelor Degradarea ECM Afectarea membranei Tulburarea microcirculației Activarea leucocitelor Deteriorarea celulelor Deteriorarea endotelială Enzime Citokine Figura 1: Cercul vicios de ischemie-reperfuzie daune: Procesele din ischemie (deasupra) provoacă leziuni celulelor în reperfuzie (dedesubt), ceea ce duce la deteriorarea hipoxică a țesutului.
17 17 2. SCOPUL STUDIULUI Scopul prezentului studiu experimental a fost de a investiga efectul ischemiei de o oră și al reperfuziei de două ore asupra microcirculației pancreasului. S-a examinat dacă și cum se schimbă condițiile în timp. Mai mult, ar trebui să se stabilească dacă și în ce mod inducția exogenă a hem oxigenazei inductibile (HO-1) influențează aceste condiții. În special, au fost examinate densitatea capilară funcțională ca parametru al situației de aprovizionare nutrițională în reperfuzie și interacțiunea leucocită-endotelial ca parametru pentru reacția inflamatorie timpurie. Pentru determinarea acestor parametri s-a folosit metoda de microscopie epifluorescentă intravitală. Influența hemoxigenazei în exprimarea și activitatea sa a fost verificată de biologia moleculară. Lucrarea este împărțită în următoarele secțiuni: 1. Efectele ischemiei și reperfuziei asupra microcirculației pancreasului fără influență exogenă asupra hem oxigenazei 2. Efectele inducției hem oxigenazei asupra microcirculației pancreasului în pancreatita post-ischemică
22 22 Figura 5: Traseul schematic al vaselor din arterele pancreatice (de la HOFFMANN 70)
24 24 Japonia) se interpune și data și ora sunt afișate și înregistrate pe ecranul monitorului (WV-BM 1700, diagonală de 41 cm, Panasonic, München). Prin utilizarea dispozitivelor de mărire menționate mai sus (microscop, cameră CCD, monitor), s-a realizat o mărire totală de aproximativ 680x. CCD ZG SVHS IVM TV Figura 6: configurare experimentală microscopică intravitală: Șobolan cu pancreas atașat splinei sub microscopul epifluorescențial (IVM: microscop intravital, CCD: cameră cu dispozitiv cuplat de încărcare, ZG: cronometru, SVHS: video recorder, TV: monitor) funcțional Densitatea capilară Densitatea capilară funcțională este lungimea [cm] a capilarelor perfuzate cu globule roșii în raport cu aria zonei de observare [cm²]. Capilarele care nu sunt perfuzate sau au fost perfuzate numai cu plasmă nu sunt incluse în evaluare. Pentru a vizualiza plasma, s-au injectat intravenos 0,15 ml de albumină bovină marcată cu fluorescenină izotiocianat (albumina FITC, A-9771, 0,75%, Sigma-Aldrich Co, Deisenhofen, Germania). După excitația de către sursa de lumină, izotiocianatul de fluorocrom fluorescenic emite lumină cu o lungime de undă de nm, care prin filtrul din amonte creează o imagine contrastată a microcirculației