MEA - Turnarea vaselor Petri - MycoGenetics

O metodă dovedită de cultivare a microorganismelor și ciupercilor este cultivarea în cutii Petri pe medii de cultură semi-solide, sterile de agar. Agar-agar este o polizaharidă și este fabricat din alge marine roșii. Agar este capabil să solidifice/să gelifice apă. Se formează o rețea tridimensională, care promovează în mod optim creșterea miceliului sănătos.

Instrucțiuni pentru extract de malț Agar Media de cultură

2 sticle de lapte de 1 litru din sticlă cu capac (curățat)
1 litru de apă distilată
25 g agar-agar
20 g extract de malț (pulbere)
Opțional: 2 g extract de drojdie + 1 g peptonă
Folie de aluminiu
Oala sub presiune
Filtru HEPA
40 x cutii Petri PS (sterile)
Parafilm
Steril/Dezinfectant antifect
Mănuși de unică folosintă
Apărătorul gurii

Pregătiți MEA

Mai întâi puneți toate ingredientele într-o cratiță și încălziți amestecul cu capacul închis și amestecând ocazional până când toate componentele s-au dizolvat în apă. Apoi împărțiți soluția în mod egal între ambele sticle de lapte. Deoarece extractul de malț poate spuma mult în timpul gătitului, sticlele nu trebuie să fie mai mult de jumătate pline.

Acum luați la îndemână o bucată generoasă de folie de aluminiu - dacă folia este subțire, ar trebui să luați un strat dublu - și așezați-o peste sticla de lapte deschisă. Acum puneți ușor capacul și rotiți-l ușor, astfel încât presiunea să poată fi egalizată în timpul gătitului, dar capacul încă nu cade de pe gâtul sticlei. Acum luați o altă bucată mare de folie de aluminiu și așezați-o peste capacul sticlei de lapte. Apăsați folia în jos și ferm împotriva sticlei. Asigurați-vă că nu există fisuri în apropierea capacului după aceea. Dacă este necesar, luați un alt strat de folie de aluminiu.

Mediul de cultură MEA poate fi acum sterilizat pentru 20 min la 121 ° C în autoclavă.

Sterilizați MEA

Pentru a face acest lucru, umpleți vasul cu apă, astfel încât sticlele să fie de aproximativ 3-5 cm în apă. Folosiți și inserția de sită a cratiței, astfel încât sticlele să nu stea direct pe podea. În caz contrar, există riscul ca sticla să se rupă sau ca extractul de malț să precipite în mediul nutritiv din cauza temperaturilor excesiv de ridicate (aglomerare).

Când autoclavul și-a atins temperatura de funcționare, începe timpul de sterilizare de 20 de minute, apoi lăsați oala să se răcească puțin. Între timp, vă puteți pregăti locul de muncă în fața filtrului HEPA.

Pregătiți locul de muncă al filtrului HEPA

Porniți filtrul HEPA cu cel puțin 15 minute înainte de a începe lucrul. Curățați bine suprafața de lucru cu dezinfectant de suprafață și pregătiți vasele Petri. Sticlele de lapte cu MEA care nu s-au răcit încă sunt mai sigure să se răcească înainte ca filtrul să funcționeze. De îndată ce soluția MEA a atins aproximativ 50 ° C, puteți umple vasele Petri cu ea.

Se toarnă și sigilează vasele Petri

Pentru a face acest lucru, puneți mănuși de unică folosință și o mască de față. Apoi curățați-vă mâinile cu dezinfectant. De asemenea, pulverizați ambalajul vaselor Petri cu el. Umeziți de asemenea suprafața sticlei de lapte și a foliei de aluminiu cu dezinfectant. Acum scoateți folia cât mai mult posibil, astfel încât să puteți scoate capacul. Tăiați ambalajul vaselor Petri cu un cuțit curat/steril și scoateți câte vase Petri simultan, așa cum sunt stivuite și stivuite cu o mână de sus. Așezați vasele una peste alta și soluția MEA deschisă lângă ele. Curățați-vă mâinile din nou cu dezinfectant și apoi începeți să turnați vasele Petri.

Pentru a face acest lucru, apucați vasele Petri de sus cu o mână și lăsați doar partea inferioară a vasului inferior. Luați sticla de lapte cu cealaltă mână și turnați rapid soluția în castron. Puneți din nou toate vasele Petri stivuite unele peste altele și de data aceasta ridicați-le pe toate, cu excepția celei mai mici vase Petri deja turnate și a părții inferioare a celei de a doua vase Petri, pe care acum o puteți umple cu MEA, etc.