PCA în timp real cantitativ în industrie; Știri-Medical
Disclaimer: Această pagină este o traducere automată a acestei pagini inițial în engleză. Vă rugăm să rețineți, deoarece traducerile sunt generate automat, nu toate traducerile vor fi perfecte. Acest site web și paginile sale web sunt destinate citirii în limba engleză. Orice traducere a acestui site și a paginilor sale web poate fi inexactă și inexactă, în totalitate sau parțial. Această traducere este furnizată într-o practică.
Amplificarea fragmentelor specifice de ADN
Reacția în lanț a polimerazei (PCR) este o metodă care utilizează mecanismul de replicare a ADN-ului pentru a amplifica o parte specifică a ADN-ului. Aceasta implică utilizarea ADN polimerazei, care produce noi fire ADN folosind nucleotide libere.
Folosind două bucăți scurte de ADN, cunoscute sub numele de primeri, este posibilă direcționarea ADN polimerazei către regiuni specifice ale ADN. Într-o reacție PCR normală, există cicluri de reacții care amplifică exponențial ținta ADN.
Cum măsurați cantitatea de țintă ADN ?
PCR (qPCR) în timp real sau cantitativ, un colorant fluorescent este utilizat pentru a găsi amplificarea așa cum se produce în timp real. La concentrații scăzute, semnul fluorescenței nu este detectabil deasupra fundalului. Pe măsură ce nivelurile cresc, crește și semnul de fluorescență. Numărul de cicluri necesare pentru ca semnul fluorescenței să devină detectabil este cunoscut sub numele de „valoarea Ct”. Valorile Ct sunt exprimate ca numere de ciclu, adică dacă este nevoie de 15 cicluri pentru ca semnul să fie găsit, atunci valoarea lui Ct este 15. O cantitate mai mare de ADN înseamnă că este nevoie de mai puțin timp pentru ca semnul fluorescenței să se stabilească deasupra zgomotului de fundal, ceea ce la rândul său înseamnă că durează mai puține cicluri . Prin urmare, concentrațiile mai mari de ADN au o valoare Ct mai mică.
Dacă se utilizează concentrații cunoscute de ADN alături de probele testate, atunci cantitatea de ADN din probele testate poate fi măsurată. Acest lucru este posibil datorită relației dintre valoarea Ct și cantitatea de țintă ADN; o diferență cu o valoare Ct (ciclu) corespunde unei diferențe duble în cantitatea de ADN. Prin urmare, dacă o cantitate cunoscută de ADN a avut o valoare Ct de 15, iar proba de testare a avut o valoare Ct de 14, atunci proba de testare are dublul cantității de ADN.
Diferenți coloranți fluorescenți
Există diferite tipuri de coloranți fluorescenți care pot fi folosiți în qPCR; coloranți specifici și nespecifici. Coloranții nespecifici, cum ar fi verdele SYBR, se leagă nespecific de ADN dublu catenar. Pe măsură ce cantitatea de produs PCR crește, acest lucru produce mai mult ADN dublu catenar pentru a se lega de SYBR verde. Aceasta înseamnă consecutiv că există un semn fluorescent mai intens. Cu toate acestea, problema este că se poate lega de orice ADN dublu catenar, cum ar fi primeri, nu doar porțiunea țintă fiind amplificată.