Platforma de transplant de măduvă osoasă pentru a investiga rolul celulelor dendritice în
rezumat
Boala grefă contra gazdă este o complicație majoră după transplantul alogen de măduvă osoasă. Celulele dendritice joacă un rol critic în patogeneza bolii grefă contra gazdă. Articolul curent descrie o nouă platformă de transplant de măduvă osoasă pentru a studia rolul celulelor dendritice în dezvoltarea bolii grefă contra gazdă și a efectului grefă versus leucemie.
Abstract
Introducere
Transplantul de celule stem hematopoietice alogene (BMT) este o terapie eficientă pentru tratarea malignităților hematologice 1,2 prin efectul grefă versus leucemie (GVL) 3. Cu toate acestea, limfocitele donatoare încă provoacă atacuri imunologice nedorite împotriva țesuturilor primitoare, un proces numit boală grefă contra gazdă (GVHD) 4 .
Activarea limfocitelor T donatoare de către celulele prezentatoare de antigen gazdă (APC) este esențială pentru dezvoltarea DGV. Dintre APC, celulele dendritice (DC) sunt cele mai puternice. Sunt inerent capabili să inducă GVHD datorită absorbției lor superioare de antigen, a expresiei moleculelor co-stimulatoare a celulelor T și a producției de citokine pro-inflamatorii care polarizează celulele T în subseturi patogene. DC-urile primitoare sunt esențiale pentru facilitarea amorsării celulelor T și inducerea GVHD după transplant 11, 12. Ca urmare, CDC-urile au devenit ținte interesante în tratamentul GVHD 12 .
TBI este necesar pentru a îmbunătăți greutatea celulelor donatoare. Datorită efectului TBI, DC-urile primitoare sunt activate și supraviețuiesc pentru o scurtă perioadă de timp după transplant 12. În ciuda progreselor semnificative în utilizarea bioluminiscenței sau fluorescenței, stabilirea unui model eficient pentru a studia rolul DC primitor în GVHD este încă dificilă.
Deoarece celulele T donatoare sunt forța motrice a activității GVL, strategiile de tratament care utilizează medicamente imunosupresoare, cum ar fi steroizii pentru a suprima aloreactivitatea celulelor T, cauzează adesea recăderea sau infecția tumorii. Prin urmare, direcționarea CD-urilor destinatarilor poate oferi o abordare alternativă pentru tratarea GVHD, păstrând în același timp efectul GVL și evitând infecția.
Pe scurt, prezentul studiu oferă o platformă pentru a înțelege modul în care diferite tipuri de semnalizare din CD-urile destinatarului reglementează dezvoltarea GVHD și a efectului GVL după BMT.
Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.
Protocol
Procedurile experimentale au fost aprobate de Comitetul instituțional de îngrijire și utilizare a animalelor de la Universitatea din Florida centrală.
1. Inducerea GVHD
NOTĂ: Transplantul de celule alogene ale măduvei osoase (BM) (etapa 1.2) se efectuează în decurs de 24 de ore după iradiere. Toate procedurile descrise mai jos sunt efectuate într-un mediu steril. Efectuați procedura într-o hota de cultură de țesut și utilizați reactivi filtrați.
2. Model de cotransplant
3. Modele BMT GVHD/GVL
Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.
Rezultate reprezentative
Modelul B6 major MHC (H2k b) -BALB/C (H2k d) a corespuns îndeaproape cu dezvoltarea GVHD după transplant (Figura 2). Cele șase semne clinice ale GVHD stabilite anterior de Cooke și colab. 16 au apărut la pacienții transplantați cu celule T WT-B6, dar nu la pacienții transplantați cu BM singuri (etapa 1.5), care au reprezentat grupul GVHD-negativ. Există două faze în dezvoltarea GVHD în acest model. În primul rând, vârful de severitate este de aproximativ 11 zile după transplant, urmat de o reducere a scorurilor clinice și recuperarea greutății corporale până la 16 zile. În această fază, mai multe mecanisme, cum ar fi inflamația și sindromul de greutate indus de radiații, conduc patogenul bolii și GVHD. Beneficiarii cedează în mod uniform la GVHD aproximativ 30 până la 40 de zile după transplant.