Produse medicinale obținute din extracte de plante ca inhibitori ai lipazei - SCHREZENMEIER JUERGEN

1. Utilizarea următoarelor substanțe, extracte de substanță sau esențe de substanță ca componente individuale sau ca amestec pentru producerea unui medicament administrat oral care acționează ca un inhibitor al lipazei:
Cardamom și/sau
Maghiran și/sau
Cimbru și/sau
Chili (Capsicum frutescens) și/sau
Primula de seară și/sau
Frunze de oregano (oreganum vugare) și/sau
Frunze de mușețel (Chamomilla recutica) și/sau
Nucșoară (Myristica fragrans) și/sau
Sos de mere (tescovină) și/sau
Germeni de cereale și/sau
Migdală și/sau
Alune și/sau
Nuc și/sau
Semințe de dovleac și/sau
Cuphea wrightii și/sau
Primula de seară și/sau
Inul uleios (Linum usitatissimum) și/sau
brusture mare (Arctium lappa L) și/sau
In și/sau
Germenii de Helianthus annuus (floarea-soarelui) și/sau
Gălbenele (Calendula officinalis) și/sau
Echinops banaticus și/sau
Mallotus philippinensis și/sau
Rapiță și/sau
Susan și/sau
chimion negru și/sau
Cynoglossum officinale și/sau
Lapachotea și/sau
Arctostaphylos uva-ursi și/sau
Floare de piatră (Flor de piedra) și/sau
Propolis și/sau
Primula Veris și/sau
Magnolia officinalis și/sau
Țelină (Apium graveolens)

obținute

2. Utilizarea următoarelor substanțe, extracte de substanță sau esențe de substanță ca componente sau amestecuri individuale
Cardamom și/sau
Maghiran și/sau
Cimbru și/sau
Chili (Capsicum frutescens) și/sau
Primula de seară și/sau
Frunze de oregano (oreganum vugare) și/sau
Frunze de mușețel (Chamomilla recutica) și/sau
Nucșoară (Myristica fragrans) și/sau
Sos de mere (tescovină) și/sau
Germeni de cereale și/sau
Migdală și/sau
Alune și/sau
Nuc și/sau
Semințe de dovleac și/sau
Cuphea wrightii și/sau
Primula de seară și/sau
Inul uleios (Linum usitatissimum) și/sau
brusture mare (Arctium lappa L) și/sau
In și/sau
Germeni de Helianthus annuus (floarea-soarelui) și/sau
Gălbenele (Calendula officinalis) și/sau
Echinops banaticus și/sau
Mallotus philippinensis și/sau
Rapiță și/sau
Susan și/sau
chimion negru și/sau
Cynoglossum officinale și/sau
Lapachotea și/sau
Arctostaphylos uva-ursi și/sau
Floare de piatră (Flor de piedra) și/sau
Propolis și/sau
Primula Veris și/sau
Magnolia officinalis și/sau
Țelină (Apium graveolens)
ca inhibitori ai lipazei.

Acest lucru poate fi realizat în mod sistematic cu substanțe active care sunt absorbite singure sau sunt inactivate în timpul digestiei și sunt astfel eliminate din greutatea de reacție cu complexul lipază-colipază-grăsime.

Administrarea inhibitorilor de lipază este considerată medicament util pentru pacienții cu simptome de sindrom metabolic. În plus, un extract de plantă care inhibă lipaza sau componentele izolate din acesta pot fi utilizate ca aditivi alimentari.

Utilizarea extractelor de plante ca posibili inhibitori ai lipazei în tractul digestiv este menționată din mai multe brevete. Acestea sunt aplicații japoneze cu următoarele numere: JP 2003 026 585, JP 2002 275 077, JP 2002 047 194 .

Efectele pozitive ale extractelor de plante asupra profilului lipidic postprandial au fost descrise în mai multe publicații, și anume următoarele substanțe precum Zylokaria Paliurus, semințe de struguri, salvie, Cassia mimosoides, L. var. Nomame Makine și Alpinia officinarum.

În plus, invenția și-a stabilit sarcina de a determina alte plante care pot fi utilizate ca inhibitori ai lipazei.

Pentru a rezolva această problemă, sunt menționate extracte sau esențe ale următoarelor substanțe și amestecurile acestora.
Cardamom
maghiran
cimbru
Ardei iute (Capsicum frutescens)
Primula de seară
Frunze de oregano (oreganum vugare)
Frunze de mușețel (Chamomilla recutica)
Nucșoară (Myristica fragrans)
Sos de mere (tescovină)
Germeni de cereale
migdale
alun
nuc
Seminte de dovleac
Cuphea wrightii (e)
Primula de seară
In de ulei (Linum usitatissimum)
brusture mare (Arctium lappa L) (e)
In (e)
Germeni de Helianthus annuus (floarea-soarelui) (e)
Gălbenele (Calendula officinalis) (e, h)
Echinops banaticus
Mallotus philippinensis (e)
Rapiță, (e)
Susan (e)
chimen negru (substantiv)
Cynoglossum officinale
Lapachotea (e)
Arctostaphylos uva-ursi
Floare de piatră (flor de piedra)
Propolis
Primula Veris
Magnolia officinalis
Țelină (Apium graveolens)

Descrierea preparatului extractelor a) Extracte de CO 2:

Extracție la presiune înaltă cu dioxid de carbon supercritic. Nu conține apă, zahăr sau proteine.

Cardamom:

  • O parte a plantei utilizate: semințe cu capsule de la Elettaria cardamomum.
  • Materia primă a fost obținută din Guatemala.
  • Consistența extrasului: lichid uleios
  • Extractul conține 72% uleiuri esențiale
  • Alte componente:
    α-pinen, β-pinen, β-mircen, 1,8 cineol, linalol, α-terpineol, acetat de linalil, terpinilacetat
Maghiran:
  • Parte a plantei folosite: frunze de oregano majorana
  • Consistența extrasului: lichid uleios
  • Extractul conține 80% uleiuri esențiale
  • Alte componente:
    Sabinen, cis și trans Sabinenhydrate, Terpinen-4-ol, Sabinenhydratacetat
cimbru

O parte a plantei utilizate: frunze de timus vulgaris. Materia primă a fost obținută din Germania. Pentru informații suplimentare, consultați cardamomul de mai sus.

Substanțele care inhibă lipaza din extractele din plante nu au fost încă identificate.

Descrierea preparatului și a procedurii de determinare a activităților enzimatice. Pregătirea soluției de testat

Pentru a prepara soluția de testat din pulbere extrasă și material lichid, 200 mg din materialul extras sunt dizolvate în 1 ml de solvent adecvat și agitate energic. După centrifugare la 3400 rotații timp de 5 minute, componenta lichidă obținută este utilizată ca soluție de testare. Pentru a ajusta raportul dintre concentrația constituenților solizi și masa enzimatică din ultimul experiment, soluția testată a fost diluată într-un raport de 1: 200 pentru a determina fosfataza alcalină.

Pentru a prepara soluția testată din extracte de CO 2 și oleorezine, 100 μl de extract lichid uleios sunt dizolvate în 900 μl dintr-un tampon enzimatic adecvat și tratate cu ultrasunete la 100 wați timp de 5 minute.

Lipaza pancreatică (lipaza pancreatică)

Au fost efectuate două determinări ale lipazei pentru a determina activitatea lipazei pancreatice in vitro:

  • 1. Testul pentru determinarea activității lipazei constă din
    - 200 μl dintr-un tampon BICIN 50 mM/L (pH 8,0) conținând 1% gumă tehnică arabică.
    - 50 μl de soluție de extract de plante și
    - 25 μl dintr-o soluție de lipază pancreatică de 0,35 mM/L

Acest amestec a fost incubat timp de 20 minute la 37 °.

Măsurarea finală a activității lipazei pancreatice se efectuează într-un autoanalizator pentru chimie clinică (Konelab, Kone), folosind un test colorimetru lipazic cu un diacilglicerol cu ​​metilrezorufină în poziția a treia ca substrat și colipază și săruri biliare ca cofactori esențiali. Acest proces este specific lipazei prancreatice și se bazează pe enzimele care scindează metilresorufina din substrat.

Următoarea schemă de pipetare a fost aleasă pentru a determina activitatea lipazei pancreatice în autoanalizator:

  • 1. 60 μl de reactiv 1: colipază și colat
  • 2. 2 μl soluție de test + 10 μl soluție de spălare
  • 3. Incubație de 180 de secunde
  • 4. 40 μl reactiv 2: substrat colorimetric și colat
  • 5. Incubație timp de 120 de secunde

Activitatea lipazei a fost determinată pe baza a 12 puncte de măsurare după 83 de secunde. Resorufina metilică a fost măsurată fotometric la 75 nanometri.

  • 2. Inhibarea lipazei sub influența extractelor de plante a fost determinată cu o a doua metodă de măsurare a activității lipazei, în care se măsoară eliberarea acizilor grași liberi în timpul hidrolizei din trioleină de către enzimă.
    O soluție gata de utilizare (reactivul R1) este utilizată pentru a prepara amestecul de incubare. R1 constă din:
    26 mmol/L tampon Tris, pH 9,2
    19 mmol/L deoxicolat de sodiu
    0,1 mmol/L clorură de calciu
    0,3 mmol/L trioleină
    300 KU/L colipază

Amestecul de incubație este compus după cum urmează:
50 μL 26 mmol/L tampon Tris, pH 9,2
50 μL 9,7 mmol/L emulsie trioleină în R1
50 μL 0,134 mol/L lipază pancreatică în tampon Tris 26 mmol/L pH 9,2
50 μL soluție de testare

1% metilceluloză în tampon Tris 26 mmol/L (pH 9,2) a fost utilizată în investigarea extractelor de CO 2.

După un timp de incubație de 30 minute la 37 ° într-o baie de apă, reacția a fost oprită prin adăugarea a 3 ml dintr-un amestec de cloroform-heptan-metanol (50: 49: 1). Acizii grași liberi s-au extras din amestecul de reacție prin agitare puternică timp de 10 minute. După centrifugare (3400 rotații, 10 minute) se obține un reziduu de 2 ml din faza de cloroform și 1 ml dintr-un reactiv de cupru (94 ml apă pură, 6 ml NaOH 1 N, 6,45 mmol/L per Cu (NO 3) 2, Se adaugă 0,1 mol/L trietanolamină, 33% (g/v) NaCI). Acest amestec a fost agitat puternic timp de 10 minute și centrifugat la 3400 rotații timp de 10 minute. S-au luat 1 ml din lichidul supernatant și s-au adăugat 1 ml de cloroform la 0,1% bathocuproină și s-au adăugat 0,05 (g/v) 3-terț-butil-4-hidroxianisol. Complexul acid gras-cupru-bathocuproină este în cele din urmă determinat fotometric la 480 nm într-un fotometru standard.

Pentru a se asigura că scăderea activității lipazei nu se datorează unui inhibitor enzimatic nespecific sau denaturării complexului enzimatic, s-a determinat și activitatea α-amilazei și a fosfatazei alcaline. O inhibiție a α-amilazei poate avea ca efect reducerea nivelului glicemiei postprandiale și este considerată un efect pozitiv suplimentar pentru pacienții cu diabet zaharat.

Măsurătorile activității amilazei sub influența extractelor din plante au fost efectuate după cum urmează:
Amestecul de incubație pentru determinarea activității amilazei constă într-un total de 250 μL:

  • - 200 μL 50 mM/L tampon MOPSO (pH 8,0) cu 1% gumă de arabiu
  • - 25 μL de soluție de extract de plante și
  • - 25 μL dintr-o soluție de α-amilază 0,35 mM/L

Acest amestec a fost incubat timp de 20 minute la 38 ° C. Măsurarea finală a activității lipazei pancreatice se efectuează într-un autoanalizator pentru chimie chimică (Konelab, Kone).

Principiul reacției chimice:

  • 1. Etilen-p-nitrofenol- (glucoză) 7 → etilen- (glucoză) 3-4 + ρ-nitrofenol- (glucoză) 2-4
  • 2. Reziduuri de ρ-nitrofenol (glucoză) → ρ-nitrofenol (λ = 405 nm) + glucoză

Procedura de pipetă în analizorul automat pentru a determina activitățile α-amilazei a fost efectuată după cum urmează:

  • 1. 120 μL reactiv: substrat + α-glucozidază
  • 2. 300 de secunde de incubație
  • 3. 3 μL soluție de testare
  • 4. 180 de secunde de incubație

Activitatea α-amilazei este determinată prin măsurarea a 5 puncte în 120 de secunde.

Măsurarea activității fosfatazei alcaline sub influența extractelor de plante a fost efectuată după cum urmează:
Amestecul de incubație pentru determinarea activității lipazei a constat din

  • - Conținând 200 μL de un tampon HEDTA de 50 mM/L (pH 8,0),
  • - 25 μL soluție de test pentru extract de plante și
  • - 25 μL dintr-o soluție de fosfatază alcalină 0,014 mM/L

Amestecul a fost incubat timp de 20 minute la 22 ° C.

Măsurarea finală a activității lipazei pancreatice a fost efectuată într-un autoanalizator pentru chimie clinică (Konelab, Kone).

Ecuația de reacție

  • 2-amino-2-metil-1-propanol + 4-nitrofenil fosfat ester → (2-amino-2-metil-1-propanoö) fosfat + 4-nitrofenoxid (λ = 409 nm)

Procedura de pipetă în analizorul automat pentru a determina activitatea fosfatazei alcaline a fost după cum urmează:

  • 1. 150 μL reactiv
  • 2. 300 sec. Incubație
  • 3. Soluție de test de 3μL
  • 4. Incubație timp de 120 sec

Activitatea fosfatazei alcaline a fost determinată folosind 5 puncte de măsurare în 22 de secunde.

Rezultate% inhibarea enzimei în testele enzimatice: