Protocolul asupra fibrozei intestinale induse de infecția cronică cu Salmonella (tradus în germană)
rezumat
Acest protocol descrie un model de șoarece de fibroză intestinală condusă de Salmonella, care seamănă cu caracteristicile patologice majore ale bolii Crohn, inclusiv inflamația transmurală și fibroza. Această metodă poate fi utilizată pentru a evalua factorii gazdei care modifică rezultatele fibrotice la șoarecii mutanți păstrați pe un fundal genetic c57Bl/6.
Abstract
Fibroza țesuturilor, care se caracterizează prin acumularea patologică a matricei extracelulare, cum ar fi colagenul, este rezultatul inflamației persistente și al reparării neregulate. În boala inflamatorie a intestinului (IBD), fibroza duce la formațiuni de strictură recurente pentru care nu există altă terapie eficientă decât rezecția chirurgicală. Datorită debutului său tardiv, procesele care determină fibroza sunt mai puțin studiate și în mare parte necunoscute. Complicațiile fibrotice sunt, prin urmare, o provocare majoră în IBD. Acest protocol descrie un model robust in vivo de fibroză intestinală în care pretratarea cu streptomicină a șoarecilor C57Bl/6 urmată de gavaj oral cu dezinfectare vezi Fibroza cecului. Sunt explicate metodele de preparare a S. Typhimurium-AroA pentru vaccinare, cuantificarea încărcăturilor de agenți patogeni în cec și splină și evaluarea depunerii de colagen în țesuturile intestinale. Acest model experimental de boală este util pentru studierea factorilor gazdă care fie agravează, fie agravează fibroza intestinală de tip CD.
Introducere
Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.
Protocol
Toate protocoalele pentru animale au fost aprobate de Comitetul pentru îngrijirea animalelor de la Universitatea din Columbia Britanică.
1. Prepararea culturilor de Salmonella Typhimurium AroA pentru gavajul oral al șoarecilor
2. Evaluarea contaminării cu salmonella în țesuturi
3. Picrosirius Colorarea roșie și cuantificarea colagenului.
Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.
Rezultate reprezentative
Tratamentul cu streptomicină urmat de o infecție orală cu S. Typhimurium-AroA duce la inflamație intestinală robustă și fibroză, în special la nivelul cecului (Figura 1). Încărcăturile tipice de boală de 10 8-10 UFC pe 1 g cecum și 10 4 UFC pe 1 g splină pot fi recuperate de la animalele infectate (Figura 2). Evaluarea fibrozei în secțiunile cecale colorate cu roșu picrosirius arată vârful fibrozei la 21 de zile după infecție, în timp ce o mare parte a patologiei este rezolvată până în ziua 42 pi (Figura 3 și Figura 4). Depunerea de colagen este mai pronunțată în submucoasa intestinului, în timp ce fibroza este mai ușoară în membrana mucoasă.
Segmentul 1, care reprezintă vârful Cecal, poate fi utilizat pentru analiza expresiei genelor, în timp ce segmentul 2 este fixat în 10% formalină tamponată pentru histologie și segmentul 3 este omogenizat pentru enumerarea bacteriană.
Salmonella CFU pe greutatea țesutului în timpul infecției. Această cifră a fost găsită de Lo și colab. 26 s-au schimbat. Faceți clic aici pentru a vizualiza o versiune mai mare a acestei imagini.
Imagini de câmp luminos din Ceca ale animalelor neinfectate și ale animalelor la 21 și 42 de zile după infecția cu S. Typhimurium AroA. Stâlp de scară, 200 m. Această cifră a fost găsită de Lo și colab. 26 s-au schimbat.
(A.) Colorarea PSR + normalizată în zona țesutului. Semnificație determinată de testul ANOVA Kruskal-Wallis unilateral cu testul Dunn's Post. **, P 0,05. Această cifră a fost găsită de Lo și colab. 26 s-au schimbat. (B.) Exemplu de cuantificare a colagenului în țesutul cecal cu Fiji. Faceți clic aici pentru a vizualiza o versiune mai mare a acestei imagini.
Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.
Discuţie
Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.
Dezvăluiri
Autorii nu au conflicte de interese financiare de dezvăluit.