Un studiu comparativ al metodelor de livrare a medicamentelor vizate de Bullostomia urechii interne a șoarecelui Versus
Abstract
Prezentăm două tehnici microchirurgicale minim invazive la rozătoare pentru administrarea de medicamente specifice în urechea medie, astfel încât să poată ajunge la urechea internă. Prima procedură presupune puncția bulei timpanice, numită bullostomie; a doua este o injecție transtimpanică. Ambele proceduri clinice imită intratimpanic uman.
Chitosan-glicerofosfatul (CGP) și tamponul pentru lactate Ringer (RL) au fost utilizate ca vehicule biocompatibile pentru administrarea locală a medicamentelor. CGP este un polimer netoxic, biodegradabil, utilizat pe scară largă în aplicații farmaceutice. Este un lichid vâscos la temperatura camerei, dar se solidifică într-o fază semi-solidă la temperatura corpului. RL este o soluție izotonică utilizată pentru administrarea intravenoasă la om. Un volum mic al acestui vehicul este plasat cu precizie peste nișa geamului rotund (RW) prin intermediul unei bullostomii. O injecție transtimpanică umple urechea medie și permite un control mai mic, dar un acces mai larg la urechea internă.
Profilurile celor două tehnici de siguranță au fost studiate și comparate folosind teste funcționale și morfologice. Audierea a fost evaluată prin înregistrarea răspunsului trunchiului cerebral auditiv (ABR) înainte și de mai multe ori după microchirurgie. Nivelul citoarhitecturii și al conservării structurilor cohleare au fost studiate prin tehnici histologice standard în probe de cohleară de paraformaldehidă fixe și decalcificate. În paralel, au fost prelevate probe cohleare neatașate și înghețate imediat pentru a analiza profilurile de expresie genică ale markerilor inflamației prin reacția în lanț cantitativă a transcriptazei revers polimerazei (qRT-PCR).
Ambele proceduri sunt adecvate ca metode de administrare a medicamentului în urechea medie a șoarecilor, deși injecția transtimpanică s-a dovedit a fi mai puțin invazivă în comparație cu bullostomia.
Introducere
Aici descriem și comparăm cele două metode chirurgicale care au fost rafinate pentru administrarea locală a medicamentului la urechea internă a șoarecilor. Profilul celor două tehnici de siguranță a fost evaluat folosind teste funcționale, morfologice și moleculare. Audierea a fost evaluată folosind răspunsul trunchiului cerebral (ABR) 26, 27 efectuat înainte și după microchirurgie în momente diferite. Au fost utilizate proceduri de punct final pentru a diseca cohleea și a compara impactul anatomic, celular și molecular al acestor două proceduri microchirurgicale.
Protocol
Asigurați-vă că procedurile de manipulare a animalelor sunt conforme cu reglementările naționale și internaționale. Protocolul respectă liniile directoare ale Comunității Europene RD 2010/63/UE și respectiv 53/2013 din Spania.
Manipularea 1. Informații generale despre animale
-
Hrăniți șoareci ad libitum cu o dietă standard și apă potabilă. Controlează sănătatea și bunăstarea urmând Federația Asociațiilor de Știință a Animalelor de Laborator (FELASA) __gVirt_NP_NNS_NNPS 9.
3. Pregătirea vehiculului
- Pregătiți și utilizați de soluții pentru vehicule în de condiții sterile.
NOTĂ: Soluțiile lichide sunt de obicei curățate rapid prin tubul Eustachian. Diferite sisteme de administrare injectabile pot fi utilizate pentru a crește timpul de ședere al medicamentului în urechea medie, inclusiv hidrogelurile și nanoparticulele 32.- Pentru a prepara CGP-hidrogel, dizolvarea 75% chitosan deacetilat în acid acetic 0,2 M dă o soluție de chitosan 1,5-2% (g/g). Adăugați glicerofosfat 9% (g/g) la această soluție 7. Pregătiți soluția chiar înainte de administrare și păstrați hidrogelul la 4 ° C până la utilizare.
NOTĂ: CGP-hidrogelul este moderat vâscos, dar încă injectabil la această temperatură. Sub 4 ° C, se transformă într-o fază solidă, blocându-i aplicarea. După aplicare, CGP suferă o tranziție de fază la un gel semi-solid la aproximativ 15 minute la 37 ° C. - Aliquot (0,5 ml) tampon comercial RL și se păstrează la 4 ° C până la utilizare.
- Pentru a prepara CGP-hidrogel, dizolvarea 75% chitosan deacetilat în acid acetic 0,2 M dă o soluție de chitosan 1,5-2% (g/g). Adăugați glicerofosfat 9% (g/g) la această soluție 7. Pregătiți soluția chiar înainte de administrare și păstrați hidrogelul la 4 ° C până la utilizare.
4. Proceduri microchirurgicale
5. Evaluarea morfologică a citoarhitecturii cohleare
6. Expresia genei cohleare
Rezultate reprezentative
Auzul a fost testat de ABR înainte și în mod repetat după microchirurgie pentru a evalua impactul asupra funcției auditive (figura 1A). Registrele ABR au fost efectuate sub anestezie pentru a evita mișcarea și tensiunea artefactelor animalelor și, prin urmare, pentru a-i îmbunătăți reproductibilitatea. Combinația ketamină/xilazină oferă o inducție cu acțiune scurtă (2-3 minute) și o fază de întreținere stabilă și sigură în timp ce se efectuează înregistrări ABR. Trebuie remarcat faptul că izofluranul poate afecta măsurarea sensibilității ABR 38. Pentru registrele ABR, electrozii subdermici sunt așezați în locații specifice. (figura 1B) iar impedanța electrică este măsurată. Dacă impedanța este de 3 kohmi sau mai mult, poziționarea electrodului trebuie controlată pentru a evita modificările amplitudinii undei ABR.