Universitatea Ruhr Bochum Prof.
Universitatea Ruhr Bochum Prof. Dr. med. Ulrich Mittelkötter Locul de muncă: Katharinen- Spitalul Unna Departamentul de Chirurgie Generală și Viscerală Rolul kinazelor terminale c-jun N (JNK1 și JNK2) în modelul de colită DSS cu doze mici Disertație inaugurală pentru obținerea unui doctorat în medicină de la o facultate medicală înaltă din Ruhr Universitatea din Bochum prezentată de Elisabeth Frick din Orsk/Orenburg 2009
Decan: Prof. Dr. G. Muhr Vorbitor: Prof. Dr. Co-arbitru U. Mittelkötter: Prof. Dr. A. Tannapfel Ziua examenului oral: 3 decembrie 2009
Dedicat familiei mele cu recunoștință
3.1.1 Evaluarea DAI: JNK1 -/- versus JNK1 +/+. 33 3.1.2 Evaluarea DAI: JNK2 -/- versus JNK2 +/+. 34 3.2 Scorul de deteriorare a criptelor (CDS) - evaluare histologică. 35 3.2.1 Evaluarea CDS: JNK1 -/- versus JNK1 +/+. 35 3.2.2 Evaluarea CDS: JNK2 -/- versus JNK2 +/+. 36 3.2.3 Rezumat. 38 3.3 Evaluări ale imunofluorescenței. 39 3.3.1 Expresia CD8 în Villi: JNK2. 39 3.3.2 Expresia CD4 în Villi: JNK2. 41 4 Discuție. 43 4.1 Inhibarea JNK și a altor MAPK în terapia IBD. 43 4.2 Colita DSS ca model animal. 44 4.3 Rezumatul rezultatelor proprii. 45 4.4 Analiza rezultatelor proprii pe fondul studiilor curente. 47 4.5 Rezumat. 50 5 Bibliografie. 52 Mulțumiri CV 2
Lista abrevierilor Fig. Figura AK Anticorpi AS aminoacizi ATP adenozin trifosfat Bcl-1 leucemie/limfom cu celule B 1 sau aprox. CARD domeniu de recrutare caspază CD cluster de diferențiere CDS Scor de deteriorare a criptelor CED boală inflamatorie intestinală CU colită ulcerativă CY2 carbocianină CY3 Indocarbocianină d zi Indicele activității bolii DAI DAPI 4, 6-diamino-2-fenilindol dihidroclorură Acid DMD-acid pimelic Acid D-glu-mezo-diamino-pimelic ADN acid dezoxiribonucleic DSS dextran sulfat de sodiu ELK1 factor de transcripție ERK semnal extracelular reglementat kinază și colab. et alii g grame GALT țesut limfoid asociat intestinului G-CSF factor de stimulare a coloniei de granulocite GM-CSF factor de stimulare a coloniei de granulocite-macrofage OMG organisme modificate genetic HE hematoxilină/eozină HLA antigen leucocitar uman ICAM-1 moleculă de aderență intercelulară IEZ IFN interferon celule epiteliale IF imunofluorescență Imunoglobulina II interleukina IMAC macrofage intestinale iv intravenos JIP JNK-interacting protein JNK c-jun NH2 terminal kinase kda Kilodalton ko knock out l litru LBP LPS-binding protein LPS lipopolizaharidă LRR leucină bogată repetă M molar (mol/l) 3
MAPK proteină kinază activată cu mitogen MC Boala Crohn MCP-1 monocit proteine chimio-atractive 1 MHC complex major de histocompatibilitate min minute (minute) milioane MIP1 macrofage proteine inflamatorii ml mililitru NBD domeniu de legare a nucleotidelor NF-kB factor nuclear-kb celule NK celule ucigașe naturale NOD Domeniul de legare a nucleotidelor și oligomerizare PBS fosfat tamponat cu soluție salină, tampon fosfat PCR polimerază reacție în lanț PP Plăci Peyer PRR receptorii de recunoaștere a agenților patogeni ARN acid ribonucleic RT temperatura camerei SAPK proteină kinază activată la stres SCID deficiență imunitară severă SEM eroare standard a STAT-3 Semnal traductor și activator de transcripție factor de creștere TGF-beta transformant beta celule Th 1/2 celule T-helper TJ joncțiune strânsă TLR receptor asemănător cu TNBS acid trinitrobenzen sulfonic TNF factor de necroză tumorală U unități peste noapte vs. versus vwf von Willeband factor WT tip sălbatic de ex. de exemplu µ micro 4
Lista tabelelor Tabelul 1: Prezentare generală a unor modele animale de colită. 21 Tabelul 2: Calculul scorului clinic din parametrii pierderea în greutate, calitatea scaunului și sângele în scaun (modificat din Cooper și colab., 1993). 25 Tabelul 3: Scorul histologic al afectării mucoasei (modificat din Egger, 1997). 28 Tabelul 4: Anticorpi primari. 31 Tabelul 5: Anticorpi secundari. 31 5
Lista figurilor Figura 1: Structura clasică a unei cascade de proteină kinază activată cu mitogen (MAPK) [22]. 15 Figura 2: Structura moleculară a DSS. 20 Figura 3: Imagini ale intestinului. 26 Figura 4: Indicele activității bolii: JNK1 -/- vs. JNK1 +/+. 34 Figura 5: Indicele activității bolii: JNK2 -/- vs. JNK2 +/+. 35 Figura 6: Evaluarea scorului de deteriorare a criptelor: JNK1 -/- vs. JNK1 +/+. 36 Figura 7: Evaluarea scorului de deteriorare a criptelor: JNK2 -/- vs. JNK2 +/+. 37 Figura 8: Imagini reprezentative HE din colonul distal. 38 Figura 9: Expresia CD8 în vilozități ale colonului distal (JNK2). 40 Figura 10: Imagini IF pentru expresia CD8 în JNK2 în colonul distal. 40 Figura 11: Expresia CD4 în vilozități ale colonului distal (JNK2). 41 Figura 12: imagini IF pentru expresia CD4 în JNK2 în colonul distal. 42 6
Cascade comutate în serie de pași de fosforilare care amplifică răspunsul prin progresia transmisiei (amplificarea semnalului). Dintre grupul mare de proteine kinaze, familia așa-numitelor proteine kinaze activate de mitogen (MAPK) a câștigat recent o importanță specială [59, 66]. Acestea includ kinaza N-terminală c-jun (JNK) și kinaza p38. Figura 1: Structura clasică a unei cascade de proteină kinază activată cu mitogen (MAPK) [22]. JNK este activat de MKK4 și MKK7. Aceste MAPKK sunt la rândul lor activate de diferite MAPKinază kinază kinaze (MAPKKK), care la rândul lor sunt stimulate de stimuli precum creșterea și factorii de stres. 15