Aderența celulară - oameni - nutriție - mediu
Principiul modelului de flux
Recrutarea și activarea acestor leucocite este un proces în mai mulți pași care include rularea,
(A) Prepararea HUVEC obținută din venele cordonului ombilical; (B) camera de curgere și sistemul de perfuzie, precum și (C) documentația video a celulelor aderente utilizând modelul de flux. include adeziunea fermă a leucocitelor la endoteliu, diapedeză transendotelială și migrarea controlată chimiotactic la locul inflamației.
Moleculele de adeziune endotelială și leucocitară ale familiilor de selectină și integrină (de exemplu, E-, P- sau L-selectină și LFA-1 (CD11a/CD18), VCAM, ICAM) sunt esențiale pentru extravazarea neutrofilelor în timpul proceselor inflamatorii, ca ele mediază procesele de adeziune celulară menționate mai sus.
Ca parte a unui model in vitro de investigare a aderenței și rulării, celulele endoteliale (celule HUVEC) sunt mai întâi cultivate pe lamele de microscop. După atingerea confluenței, celulele sunt plasate într-o cameră de curgere și leucocitele sunt trecute peste celulele endoteliale cu o pompă de perfuzie, prin care forțele de forfecare intravasculare pot fi calculate și ajustate.
Imagine din stânga sus.
Principiul modelului static
Ca parte a unui model in vitro de examinare a aderenței, celulele endoteliale (celule HUVEC) sunt mai întâi cultivate pe plăci cu mai multe godeuri, ca în modelul de flux. După atingerea confluenței, celulele sunt stimulate cu activatorii corespunzători și incubate cu celule mononucleare colorate anterior (limfocite T) și apoi intensitatea colorării este măsurată fluorimetric, care este proporțională cu celulele aderente.
Colorantul calceină-AM este utilizat pentru colorarea celulelor mononucleare. Acest colorant non-fluorescent pătrunde în membrana celulară și este scindat intracelular de esteraze nespecifice și se formează calceina fluorogenă nepermeabilă. Calceina, cunoscută și sub denumirea de Fluorexon, este un derivat al fluoresceinei și are maximul de excitație la 495 nm (excitație) și maximul de emisie (emisie) la 515 nm și poate fi astfel înregistrat cantitativ în cititorul Fluoroscan.
Evaluarea procesului
Folosind documentația video, seriile de imagini sunt evaluate în cadrul modelului de flux și atașarea celulelor mononucleare pe unitate de imagine este înregistrată.
Figura de deasupra.
Costul modelului de flux
Aproximativ. 100 € per multiplă cu 4 godeuri
Costul modelului static
Exemplu de aplicație
Influența oligozaharidelor din lapte asupra aderenței leucocitelor la celulele endoteliale umane (Bode și colab. 2004a, b și Reiss și colab. 2004)