Autoradiografie - Biologie
Cât de fierbinte este prea fierbinte pentru viața adâncă sub fundul oceanului?
Antibiotice din bacterii
Migrația celulară: funcția nou descoperită a unei proteine cunoscute
Busolă moleculară pentru alinierea celulelor
Ceea ce face ca frunzele să îmbătrânească toamna
Democrația bibilicilor vultur
Mediul lui Ekembo: Oamenii au trăit și în peisaje deschise
| Genetica | Agricultură, silvicultură și creșterea animalelor
Soiul de grâu a fost creat prin traversarea ierburilor sălbatice
Cât de fierbinte este prea fierbinte pentru viața adâncă sub fundul oceanului?
Autoradiografie
| Acest articol sau secțiunea următoare nu sunt furnizate în mod adecvat cu documente justificative (de exemplu, dovezi individuale). Prin urmare, datele în cauză sunt eliminate în curând. Vă rugăm să ajutați Wikipedia cercetând informațiile și adăugând dovezi bune. Mai multe detalii pot fi oferite pe pagina de discuții sau în istoricul versiunilor. În cele din urmă, vă rugăm să eliminați acest semn de avertizare. |
Autoradiografie sau Radiografie (prescurtarea frecventă AURA) se referă la vizualizarea unei componente chimice de către izotopi radioactivi, inițial prin înnegrirea unui film fotografic, acum din ce în ce mai mult cu ajutorul unui detector de radiații. Înregistrarea obținută este Autoradiogramă numit.
Aplicații
Timp de trei decenii, autoradiografia a fost o parte integrantă a analizei secvenței ADN a lui Sanger. Cu toate acestea, din ultimii ani ai secolului al XX-lea, nucleotidele ADN fluorescente în loc de marcate radioactiv au fost utilizate din ce în ce mai mult pentru analiza secvenței.
Autoradiografia este, de asemenea, utilizată în producția de proteine recombinante, analiza reacțiilor enzimatice sau identificarea substraturilor enzimatice.
Este, de asemenea, utilizat în farmacocinetică pentru a efectua studii de eliminare prin distribuție prin absorbție prin eliberare (LADME).
execuţie
Comună tuturor aplicațiilor autoradiografiei este necesitatea de a contrabanda izotopi radioactivi în moleculele de analizat. Datorită apariției frecvente a izotopilor stabili corespunzători în biomolecule și a pericolului relativ scăzut al acestora, se utilizează adesea radioizotopii 14 C (carbon), 35 S (sulf), 32 P (fosfor) și 3 H (tritiu).
O tulpină bacteriană transformată cu o plasmidă de expresie este tratată cu un mediu nutritiv care conține aminoacidul marcat radioactiv 35 S-metionină. 35 S-metionina este încorporată în proteina recombinantă care este codificată pe plasmidă. Un extract bacterian este separat prin SDS-PAGE, gelul este uscat și se aplică un film. După ce filmul este „expus” razelor beta emise de izotopi, poziția proteinei recombinante este vizibilă pe filmul dezvoltat.
Al doilea exemplu - analiza activității enzimei
O ATPază, o enzimă care clivează nucleotida ATP, este incubată cu 32 P-ATP marcat radioactiv. Amestecul este separat după diferite timpuri prin cromatografie în strat subțire, placa de cromatografie este uscată și plasată pe film. Înnegrirea filmului cu 32 P-fosfat reflectă activitatea enzimei.