Blocarea activității tlr2 scade și stabilizează leziunile aterosclerotice avansate în

activității

  • Abstract
  • Poartă:
  • Metodele:
  • Rezultate:
  • Concluzie:
  • introducere
  • Materiale și metode
  • Animale și design experimental
  • Colectarea și prelucrarea țesuturilor
  • Analiza biochimică
  • Colorare histologică și imunohistochimică
  • Testarea in situ din etichetare nickend mediată prin dUTP de ToT
  • Western blots
  • analize statistice
  • Rezultate
  • Blocarea activității TLR2 reduce și stabilizează leziunile aterosclerotice ale arterei brahiocefalice
  • Blocarea TLR2 ameliorează inflamația arterelor aterosclerotice
  • Blocarea TLR2 scade apoptoza macrofagelor și expresia CHOP în leziunile aterosclerotice avansate
  • TLR2 este implicat în formarea accelerată a aterosclerozei și reglează expresia CHOP și apoptoza la șoarecii cu deficit de ApoE care primesc diete HC.
  • Discuţie
  • Contribuția autorului

Abstract

Poartă:

Semnalizarea receptorului de tip 2 (TLR2) joacă un rol esențial în inițierea aterosclerozei. Scopul acestui studiu a fost de a investiga dacă blocarea activității TLR2 ar putea avea efecte terapeutice asupra aterosclerozei avansate.

Metodele:

Șoarecii cu deficiență de apolipoproteină E (ApoE -/-) în vârstă de patruzeci de săptămâni hrăniți cu o dietă normală au fost injectați intravenos cu anticorp neutralizant TLR2 sau cu IgG asociat cu izotip timp de 18 săptămâni. Șoarecii ApoE dublu knockout - Tlr2 -/- au fost luați ca martor pozitiv. La sfârșitul tratamentelor, au fost măsurate nivelurile lipidelor plasmatice și au fost analizate morfologia plăcii, expresia citokinelor pro-inflamatorii și apoptoza în artere. În a doua parte a acestui studiu, șoarecii ApoE -/- și ApoE -/- Tlr2 -/- în vârstă de 6 săptămâni, au alimentat dieta de scădere a colesterolului timp de 12 până la 24 de săptămâni, au demonstrat niveluri de expresie TLR2 și markeri. arterele. examinat.

Rezultate:

Blocarea activității TLR2 cu anticorpul neutralizant TLR2 sau inactivarea genei Tlr2 nu au modificat nivelul lipidelor plasmatice la șoarecii ApoE -/-. Cu toate acestea, manipulările genetice și farmacologice au redus dramatic dimensiunea plăcii și stenoza vaselor, precum și stabilitatea plăcii în arterele brahiocefalice. Efectele protectoare ale antagonismului TLR2 au fost asociate cu suprimarea expresiei citokinelor pro-inflamatorii IL-6 și TNF-α și cu inactivarea factorilor de transcripție NF-KB și Stat3. În plus, blocarea activității TLR2 a atenuat apoptoza macrofagelor indusă de stres a arterelor brahiocefalice, care poate promova rezoluția nucleilor necrotici în ateroscleroza avansată. În plus, o dietă bogată în colesterol accelerează mai accentuat formarea aterosclerozei și crește expresia proteinei pro-apoptotice CHOP și apoptoza la șoarecii ApoE -/- în comparație cu șoarecii ApoE -/- Tlr2 -./- .

Concluzie:

Blocarea farmacologică sau genetică a activității TLR2 scade și stabilizează leziunile aterosclerotice avansate la șoarecii ApoE -/-. Astfel, vizarea semnalizării TLR2 ar putea fi o strategie terapeutică promițătoare împotriva aterosclerozei avansate.

introducere

Ateroscleroza este o cauză frecventă a bolilor cardiovasculare. Boala cardiovasculară este principala cauză de deces și reprezintă o amenințare tot mai mare pentru sănătatea umană la nivel mondial 1. Studiile epidemiologice și experimentale au stabilit rolul predominant al inflamației în toate etapele aterosclerozei, de la formarea plăcilor aterosclerotice stabile timpurii până la plăcile avansate care tind să se rupă 2, 3, 4, 5. Recent, mai multe studii au investigat efectele intervențiilor farmacologice asupra stabilității plăcilor avansate, întrucât întreruperea leziunilor instabile contribuie la sindromul coronarian acut 4, 6, 7. Plăcile instabile sunt caracterizate de nuclee necrotice mari umplute cu lipide încapsulate de un capac fibros subțire, niveluri ridicate de mediatori proinflamatori și proteaze matriciale și apoptoză. Dezvoltarea plăcilor instabile este asociată cu implicarea sistemelor imune înnăscute și adaptive.

Receptorii asemănători taxelor (TLR) sunt o familie de receptori de recunoaștere a modelelor care joacă un rol cheie în imunitatea înnăscută și inițiază răspunsuri inflamatorii. Ligarea acestor receptori inițiază activarea factorului nuclear-KB (NF-KB), rezultând în exprimarea unei game largi de gene inflamatorii 8, 9. Printre TLR-urile caracterizate, TLR2 este unic datorită capacității sale de heterodimerizare cu TLR1 sau TLR6, rezultând o specificitate relativ largă a ligandului, cuprinzând atât liganzi endogeni cât și exogeni 10, 11. De remarcat, toți potențialii agoniști endogeni TLR2, inclusiv biglycan, proteina cromozomului cu mobilitate ridicată 1 (HMGB1) și componentele lipoproteice oxidate, se găsesc în leziunile aterosclerotice 12, 13, 14. Mai mult, calea de semnalizare TLR2 este asociată cu răspunsul la stres al reticulului endoplasmatic (ER). Stresul ER poate crește expresia TLR2 in vitro și in vivo, iar TLR2 contribuie la apoptoza macrofagelor sub stres ER declanșat de lipida 15. Astfel, TLR2 ar putea fi o țintă potențială pentru intervenții terapeutice în tratamentul aterosclerozei.

Materiale și metode

Animale și design experimental

Șoarecii ApoE -/- Tlr2 -/- au fost generați din încrucișări heterozigote ale șoarecilor ApoE -/- (fundal C57BL/6, Jackson Laboratory) și șoareci Tlr2 -/- (fundal C57BL/6, Laborator Jackson). Genotipurile șoarecilor knockout dublu homozigoti sau șoarecii knockout unici ApoE au fost confirmate prin PCR, așa cum s-a descris anterior 18. Toate animalele au fost adăpostite în condiții normale de umiditate, temperatură a camerei și cicluri de lumină neagră, cu acces la apă și alimente ad libitum. Studiile au fost realizate în conformitate cu principiile stabilite de Comitetul instituțional pentru etica protecției și tratamentului animalelor în cercetarea biomedicală (Beijing, China).

Colectarea și prelucrarea țesuturilor

După ce șoarecii au postit 4 ore, sângele a fost extras din plexul venos retro-orbital pentru măsurarea lipidelor. Șoarecii au fost apoi anesteziați cu 50 mg/kg ip pentobarbital și infuzați în ventriculul cardiac stâng cu soluție salină tamponată cu fosfat sub presiune fiziologică. Aortele au fost excizate rapid, înghețate instantaneu de la arcada aortică la bifurcația iliacă și ținute la -80 ° C înainte de analiza proteinelor. Întreaga arteră brahiocefalică a fiecărui animal a fost fixată în paraformaldehidă 4% timp de 24 de ore la 4 ° C, încorporată în parafină și tăiată în serie (grosime 5 µm).