Crearea adeziunilor abdominale în protocolul șoarecilor (tradus în germană)
Introducere
Aderențele abdominale sunt o formă de țesut cicatricial care se formează în abdomen ca răspuns la inflamație, de obicei după intervenție chirurgicală sau infecție intraabdominală. Adeziunile sunt principala cauză a durerii abdominale cronice și a infertilității și sunt principala cauză a obstrucției intestinului subțire 1. Prezența aderențelor face ca a doua intervenție chirurgicală abdominală să fie mai dificil de realizat și crește probabilitatea de complicații 2.
În ciuda anilor de cercetare, mecanismele care stau la baza formării aderențelor rămân slab înțelese. Se știe că deteriorarea inițială a suprafeței peritoneale determină exsudarea fluidului bogat în fibrină care formează apoi un cheag care leagă suprafețele intestinului și ale peretelui abdominal 3. Mai târziu, fibroblastele și alte celule migrează în suprafața adezivă și secretă țesutul conjunctiv 4. În decurs de luni până la ani se dezvoltă aderența vaselor de sânge și a nervilor 5.
Există mai multe produse comerciale care sunt concepute pentru a reduce formarea aderențelor după o intervenție chirurgicală abdominală (de exemplu, Seprafilm). Toate aceste produse acționează ca bariere mecanice și opresc formarea aderenței prin prevenirea contactului fizic între ansele intestinale și peretele abdominal 6,7. În ciuda dovezilor dintr-un studiu controlat că o barieră de aderență chirurgicală reduce formarea de aderențe 8, anecdotic mulți chirurgi au fost dezamăgiți de eficacitatea produselor de barieră mecanică.
În prezent, nu există terapii anti-adeziune bazate pe medicamente, ceea ce reflectă faptul că procesele exacte implicate în formarea aderenței sunt slab înțelese. Dezvoltarea unei terapii care vizează în mod specific agenții celulari sau moleculari implicați în formarea aderențelor va necesita o mai bună înțelegere a evenimentelor care sunt implicate în formarea aderenței. Mai multe grupuri au identificat mecanisme moleculare care pot fi importante pentru formarea aderențelor 9-11. Modelele animale oferă un mediu excelent pentru formarea aderențelor de studiat. Multe studii au fost publicate pe mai multe animale, în special șobolani și șoareci 6,12-14 care descriu crearea chirurgicală a răspunderii. Datorită experienței noastre de fibroză la șoareci și disponibilității largi a șoarecilor transgenici și a anticorpilor pe bază de șoarece, am selectat șoarecele ca model pentru studierea aderențelor. Aici raportăm despre tehnologia pe care am dezvoltat-o pentru a crea în mod reproductibil și fiabil aderențe la mouse.
Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.
Protocol
Următorul protocol a fost aprobat de Comitetul instituțional de îngrijire și utilizare a animalelor de la Universitatea Stanford (IACUC) și îndeplinește toate liniile directoare etice instituționale privind utilizarea animalelor de laborator.
1. Crearea aderențelor
Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.
Rezultate reprezentative
La șapte zile după operație, cecul și, eventual, colonul ascendent, ficatul și buclele intestinului subțire ar trebui să fie aderente la peretele abdominal lateral. (Figura 8) Țesuturile tăiate pot fi încorporate și tăiate și oferă secțiuni histologice excelente. (11, 12)
Dacă procedura se face corect, 100% dintre șoareci ar trebui să aibă aderențe semnificative în șapte zile. Mortalitatea ar trebui să fie mai mică de 5%.
1 ">
trong> Figura 9: Decuparea țesutului de aderență. (A) și (b) O „insulă” de piele și perete abdominal fuzionată cu intestinul subiacent este eliberată prin tăierea într-un cerc complet în jurul zonei aderente. Faceți clic aici pentru a vedea o versiune mai mare a acestei figuri.
jove_content "fo: keep-together.within-page =" 1 ">
Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.
Discuţie
Pașii critici ai acestei proceduri sunt: șlefuirea completă a apendicelui fără a provoca perforații, punerea suturilor în peretele abdominal și aplicarea cantității corecte de rezistență. Aplicați doar cecum de șmirghel sau pe o mică parte specifică a intestinului. Utilizarea pe scară largă a hârtiei de smirghel pe cantități mari de intestin subțire tinde să provoace ileus semnificativ. Aveți grijă să șlefuiți apendicele cu suficientă forță pentru a face suprafața aspră, dar nu atât de mult încât peretele să crape. Găsirea acestui echilibru poate necesita timp. Prindeți cu atenție intestinul și evitați forțele ascuțite sau dentare pentru a manipula intestinul. Este ușor să provocați sângerări accidentale prin apucarea mezenterului intestinului subțire cu forceps sau prin tragerea prea puternică a intestinului.
Dacă apare o ruptură în peretele apendicelui, procedura trebuie oprită și animalul eutanasiat. Din experiența noastră, lacrima cecală are ca rezultat moartea animalelor după câteva zile, chiar dacă lacrima este reparată bine. În plus, ruperea peretelui apendicelui va provoca scaun vărsat, care va afecta răspunsul inflamator în moduri imprevizibile.
Hemostaza trebuie să fie completă la sfârșitul procedurii. Unele vase care sângerează se vor redeschide și vor începe să sângereze după ce au încetat sângerarea. În caz de îndoială, puneți o figură monofilament absorbabilă a unei suturi cu cifra opt în jurul punctului de sângerare. Acest tip de fir este preferabil suturii absorbante de mătase sau împletite, deoarece poate fi extras cu o rezistență minimă, deși țesătura. Am constatat, totuși, că sutura absorbabilă din mătase sau împletită este cea mai eficientă pentru inducerea aderențelor în peretele lateral abdominal decât monofilamentul mai puțin inflamator.
Aplicarea amidonului la sfârșitul procedurii va contribui la creșterea formării aderențelor, dar am constatat că o cantitate excesivă de amidon va provoca un răspuns inflamator care provoacă moartea. Amidonul trebuie presărat ușor. Nu ar trebui să fie atât de mult încât să formeze un strat solid.
Ca prima procedură de învățat, este obișnuit să pierzi șoareci multipli. Din experiența noastră, cele mai frecvente cauze de deces sunt deshidratarea datorată ileusului cauzată de abraziunea excesivă a intestinului și sepsisul datorat perforației intestinale. Moartea cauzată de sângerare poate apărea dacă nu se realizează hemostaza completă la sfârșitul operației.
Dacă formarea aderențelor este insuficientă, luați în considerare abraziunea agresivă a apendicelui și a peretelui lateral drept, care va lăsa o rezistență mai mare sau puneți mai multe suturi pe peretele lateral abdominal. Din experiența noastră, așteptarea mai puțin de o săptămână înainte de abdomen are ca rezultat o formare de adeziune mai mică decât adecvată pentru a se deschide din nou. Pe de altă parte, dacă rata mortalității șoarecilor este ridicată după operație, luați în considerare utilizarea abraziunii mai puțin agresive a apendicelui, mai precis pentru a inspecta hemostaza și, pe de altă parte, aplicarea mai puțin amidon. De asemenea, este important să monitorizați cu atenție rata de respirație a mouse-ului în timpul intervenției chirurgicale. Dacă chirurgul câștigă experiență cu această procedură, rata mortalității ar trebui să fie mai mică de 10%.
Această tehnică a fost dezvoltată pentru a forma în primul rând aderențe între apendice și peretele lateral drept al abdomenului. Adeziunile se vor forma adesea între intestinul subțire, ficat și incizia liniei medii. Utilizarea acestei tehnici de obicei nu va provoca aderențe pe partea stângă a abdomenului. O limitare a acestei tehnici este că aderențele dintre intestin și peretele abdominal sunt mai susceptibile de a se forma decât aderențele dintre buclele intestinelor. În plus, este puțin probabil să conducă la țesut plin de clei într-un stomac complet înghețat, ceea ce se observă adesea la persoanele care au suferit mai multe intervenții chirurgicale.
Cuprins "> Deoarece această tehnică determină în mod constant formarea de țesut adeziv între apendice și peretele lateral, credem că este concepută în mod ideal în intervențiile de testare pentru a reduce formarea aderenței. Această tehnică poate fi utilizată și pentru explorarea căilor moleculare și a tipurilor de celule sunt implicați în formarea aderenței. Țesutul de aderență este ușor decupat și gata pentru histologie, oferind imagini histologice excelente (Figurile 11, 12) poate fi.
Unii cercetători ar putea dori un model în care aderențele formează mai puțin de 100% din timp. Omiterea aplicării amidonului va reduce rata de aderență la aproximativ 80%. Reducerea numărului de fire de mătase plasate în peretele abdominal drept va reduce și mai mult rata de aderență.
Din experiența noastră, ziua șapte după operație este primul moment în care intestinul este aderat în mod constant la peretele abdominal. Cu toate acestea, alte momente pot fi, de asemenea, mai relevante, în funcție de obiectivul proiectului. De exemplu, cercetătorii interesați de migrarea neutrofilelor și macrofagelor în camera de detenție ar putea dori să poată recolta țesuturi în primele cinci zile după operație. Pe de altă parte, depunerea colagenului de către fibroblaste are loc săptămâni întregi după leziunea inițială și, pentru aceasta, este mai sensibil să examinați țesutul în momente răspândite timp de câteva săptămâni după operație.
Lupele chirurgicale sunt foarte utile pentru lărgirea câmpului chirurgical în timpul efectuării acestei proceduri. Se poate utiliza și un microscop chirurgical, dar capacitatea chirurgului de a inspecta câmpul chirurgical din diferite unghiuri este limitată. Procedura poate fi, de asemenea, efectuată fără mărire deloc.
Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.
Dezvăluiri
Autorii afirmă că nu au interese financiare.
Mulțumiri
CDM a fost susținut de American College of Surgeons (ACS) Resident Research Fellowship. MSH a fost sprijinit de Institutul California pentru Medicină Regenerativă (CIRM) Clinical Fellow Educational Grant TG2-01159. MSH, HPL și MTL au fost susținute de Societatea Americană a Chirurgilor Maxilofaciali (ASMS)/Fundația Maxillofacial Surgeons Foundation (MSF) Grant Grant Award. HPL a fost susținut de grantul NIH R01 GM087609 și un cadou de la Ingrid Lai și Bill Shu în onoarea lui Anthony Shu. HPL și MTL au fost susținute de Laboratorul Hagey pentru Medicină Regenerativă Pediatrică și Fundația Oak. MTL a fost sprijinită de Fondul Gunn/Olivier.