Metoda standardizată pentru sterilizarea de mare viteză a protocolului de semințe de arabidopsie (tradus în
rezumat
Obiectivul acestui studiu a fost de a determina efectele sterilizării cu înălbitor și clor pe gaz asupra germinării semințelor dintr-o serie de genotipuri Arabidopsis cultivate pe medii sterile. Au fost dezvoltate protocoale de sterilizare optimizate pentru a preveni creșterea contaminanților microbieni, asigurând în același timp supraviețuirea satisfăcătoare a semințelor.
Abstract
Introducere
Două metode principale utilizate pentru sterilizarea semințelor de Arabidopsis se bazează pe înălbitor comercial (faza lichidă) și clor gazos (faza de vapori). Au fost folosite diverse metode atât pentru sterilizarea în fază lichidă 1, 4, 5, 6, 7, 8, 9, sterilizarea semințelor 10, cât și pentru fazele de vapori Arabidopsis 8, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16. Cu toate acestea, în timp ce aceste proceduri au fost eficiente în realizarea sterilizării semințelor genotipurilor utilizate, nu a fost raportată analiza detaliată a efectului sterilizării diferitelor tratamente asupra semințelor de genotipuri diferite. Prin urmare, optimizarea acestor proceduri de sterilizare este necesară pentru a defini condițiile în care sterilizarea efectivă este combinată cu rate de germinare ridicate.
Centrul de resurse biologice Arabidopsis (ABRC) este poziționat în mod unic pentru a) testa viabilitatea semințelor dintr-o varietate de genotipuri diferite din colecție și b) profită de procedurile de control al calității aplicate intern și ca răspuns la feedbackul utilizatorilor cu privire la germinarea semințelor. Experimentele prezentate aici au avut ca scop determinarea efectelor diferitelor metode de sterilizare asupra germinării semințelor dintr-o serie de genotipuri Arabidopsis. Procedurile de sterilizare optimizate care duc la rate ridicate de germinare a semințelor, menținând în același timp contaminarea cu agenți patogeni minime, sunt prezentate pentru sterilizarea cu înălbitor și clor.
Protocol
1. pregătirea 1 x mediu Murashige și Skoog (MS)
2. Sterilizarea semințelor de Arabidopsis cu înălbitor
3. Sterilizarea semințelor de Arabidopsis cu gaz clor
4. Creșterea Arabidopsisului pe plăcile MS
Rezultate reprezentative
Semințele de Arabidopsis colectate dintr-un câmp deschis, seră și cameră de creștere sunt uneori contaminate cu diferite microorganisme, cum ar fi bacterii și ciuperci, 1, 4. Astfel, germinarea semințelor pe medii sterile poate fi deosebit de dificilă din cauza contaminării plăcilor, mai ales dacă aportul de semințe este limitat. Protocolul optimizat pentru sterilizarea cu înălbitor și clor gazos, ale cărui rezultate sunt prezentate mai jos, minimizează această problemă și păstrează viabilitatea semințelor necesare pentru aplicații cu randament ridicat.
Efectele sterilizării înălbitorului asupra germinării semințelor de Arabidopsis Col-0
Conform acestor rezultate, tratamentul cu o concentrație de gaz de 6,1% timp de 1 oră (masa 2) a fost ales ca cea mai bună condiție de sterilizare în fază de vapori pentru a testa efectul sterilizării cu gaz pe diferite linii mutante, deoarece se combină (rata ridicată de germinare 85%) cu un nivel foarte scăzut de contaminare prin mucegai (0,02%).