Reglarea imunității prin reglarea mucoasei celule T pozitive Foxp3 la copii și adolescenți

Reglarea imunitară prin reglarea mucoasei Celulele T pozitive Foxp3 la copii și adolescenți cu boală celiacă Disertație pentru gradul academic al Dr. med. la Facultatea de Medicină a Universității din Leipzig depusă de: Michael Bauch născut la 24 aprilie 1986 la Karl-Marx-Stadt realizat la Clinica și policlinica pentru copii și adolescenți a Universității din Leipzig Supervizor: PD Dr. med. habil. Holm H. Uhlig Decizie privind acordarea titlului de doctor din: 18.09.2012

reglarea

Cuprins Cuprins Cuprins Descriere bibliografică. 2 Cuprins. 3 Lista abrevierilor. 5 1. Introducere. 6 1.1 Boala celiacă. 6 1.1.1 Epidemiologie. 6 1.1.2 Etiopatogenie. 6 1.1.3 Diagnostic. 10 1.1.4 Terapie. 11 1.1.4.1 Dieta fără gluten. 11 1.1.4.2 Strategii de terapie experimentală. 11 1.2 Celule T de reglementare. 12 1.2.1 Tipuri de celule T reglatoare. 13 1.2.2 Mecanisme de suprimare a celulelor T reglatoare CD4 + CD25 + Foxp3 +. 14 1.3 Obiectivul tezei. 17 2. Material și metode. 19 2.1 Votul de etică. 19 2.2 Cursul studiului. 19 2.3 Recrutarea populației studiate. 20 2.3.1 Grup de pacienți celiaci. 22 2.3.2 Grupul de control. 22 2.4 Interviul telefonic Colectarea datelor anamnestice. 23 2.5 Date antropometrice. 23 2.6 Chimie clinică. 24 2.7 Boala celiacă - anticorpi specifici. 24 2.8 Colorarea secțiunilor histologice. 25 2.8.1 Pregătirea probelor de țesut. 25 2.8.2 Colorarea hematoxilin-eozinei (HE). 25 2.8.3 Colorare imunohistochimică. 26 2.8.4 Colorarea imunofluorescentă. 27 2.8.5 Microscopie și fotografie. 28 2.9 Măsurarea morfometrică a secțiunilor histologice. 28 2.9.1 Măsurarea Villi și a criptelor. 28 3

Lista abrevierilor Lista abrevierilor IMC Indicele masei corporale CD Cluster de diferențiere CTLA-4 Citotoxic T limfocit asociat antigen 4 Cy5 Cyanine 5 DAB 3,3-diaminobenzidine DAPI 4,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride FITC fluorescein tiocyanate Foxp3 3 Forkhead Box Peptida de fuziune HA hipoalergen HE hematoxilină și eozină HLA antigen leucocitar uman HRP Hrean peroxidază Hrean peroxidază IDO Indolamină-2,3-dioxigenază IEL Limfocite intraepiteliale IgA/IgG imunoglobulină-IL, interagoglobină-G enteropatie sindromul X-antigen limfocitar LAG-3 antigen limfocitar 3 MCV volum corpuscular mediu (volum mediu eritrocitar) MHC Complex major de histocompatibilitate MICA MHC clasa I secvență polipeptidică A matrice MMP metaloproteinaze Receptor NKG2D al celulelor ucigașe naturale PBST fosfat tampon salină cu Tween-20 Unități de referință SDS Standard Dev Scor de țiune TBS Tris Buffered Saline TGF-β Transforming Growth Factor beta Th T helper cell (CD4 + CD3 + T cells) TNFα tumor necrosis factor alfa 5

1. Introducere Prezenta lucrare ar trebui să examineze următoarele subiecte: 1. Un grup de copii și adolescenți cu boală celiacă ar trebui să fie caracterizat clinic, paraclinic, anamnestic și histologic. În special, markerii imuni celulari și umorali sunt comparați între grupul de pacienți celiaci și un grup de pacienți fără boală celiacă. 2. Un accent se pune pe detectarea și cuantificarea celulelor T reglatoare Foxp3 + în mucoasa intestinului subțire la copii și adolescenți cu boală celiacă și martori fără atrofie viloză. 3. Scopul este de a investiga dacă numărul de celule T reglatoare mucoase Foxp3 + la locul inflamației se corelează cu markeri anamnestici, antropometrici, serologici, hematologici și histologici la pacienții cu boală celiacă. În special, trebuie investigată dependența de vârstă și posibilele diferențe de gen în celulele T reglatoare. 18

2. Material și metode Pentru a colecta date anamnestice, la primul contact a fost efectuat un scurt interviu cu părinții. De îndată ce a fost obținut consimțământul scris, au fost solicitate probe de țesut intestinal subțire arhivate de la Institutul de patologie. În același timp, datele antropometrice, clinice, paraclinice și serologice ale fiecărui pacient la momentul endoscopiei au fost înregistrate retrospectiv. După ce probele de țesut au fost predate, acestea au fost tăiate, colorate histologic și evaluate. Toți parametrii înregistrați au fost introduși într-o bază de date Excel (Figura 2.1). Figura 2.1 Prezentare generală a cursului practic al studiului. 2.3 Recrutarea populației studiate Inițial, s-a luat contact cu părinții a 195 de copii și adolescenți. Boala celiacă a fost diagnosticată la 63 dintre acești pacienți. Boala celiacă a fost exclusă prin biopsie la 132 de pacienți. Doar 17 părinți (8,7%) au refuzat să participe la studiu după primul contact. Pentru participarea finală, consimțământul scris al zilei de 20