Semnalizare ShcA-LRP Controlul proliferării celulare și protecție împotriva

Context științific

Proteina legată de receptorul lipoproteinelor cu densitate mică (LDL) (LRP) aparține familiei genei receptorului LDL. Astfel, participă la endocitoza lipoproteinelor bogate în ApoE. S-a demonstrat că LRP poate fi implicat și în controlul proceselor de semnalizare intracelulară. Șoarecii cu deficit de LRP-1 în mod specific la nivelul VSMC au o susceptibilitate crescută de a dezvolta leziuni aterosclerotice. Aceste leziuni se caracterizează în special prin hiperproliferare a celulelor musculare netede (CMLV) cu activarea căii de semnalizare PDGF (factor de creștere derivat din trombocite) și expresie crescută a Phospho-Erk, un activator al proliferării celulare. [1]. În plus, receptorul PDGF și LRP sunt capabili să funcționeze într-un complex, activarea receptorului PDGF ducând la fosforilarea tirozinei a celui de-al doilea motiv NPxY situat în domeniul citoplasmatic al LRP [2].

Aceste rezultate arată că LRP controlează proliferarea celulară și calea PDGF și protejează împotriva aterosclerozei. Rămâne de văzut cum LRP exercită acest control.

Formarea leziunilor aterosclerotice se caracterizează prin crearea unui mediu cu potențial mitogen ridicat, bogat în factori de creștere precum PDGF BB, IGF-1 (factor de creștere asemănător insulinei). Legarea acestor factori de receptorii lor permite fosforilarea acestora din urmă și recrutarea proteinelor de semnalizare care duc la activarea cascadei MAPK. Acest lucru are ca rezultat fosforilarea ERK și proliferarea celulară.

ShcA (omologie Src și colagen) este o proteină adaptor, existentă în trei izoforme (p66, p52 și p46) capabile să retransmită activarea acestor receptori în cascada MAPK. ShcA se poate lega de reziduurile fosforilate ale porțiunii citoplasmatice a receptorilor activi. Asocierea Shc cu un receptor este o condiție prealabilă pentru fosforilarea și activarea Shc, care servește astfel ca punct de ancorare pentru recrutarea moleculelor de semnalizare. În prezent, cascada Shc: Grb2: Sos: Ras care duce în cele din urmă la fosforilarea ERK și la proliferarea celulară reprezintă cea mai cunoscută cale de semnalizare în aval de ShcA [3].

De asemenea, s-a demonstrat că ShcA a reușit să se lege de LRP fosforilat pe partea sa citoplasmatică [4]. Rolul acestei interacțiuni fizice între ShcA și LRP în proliferarea celulară și formarea leziunilor aterosclerotice este încă necunoscut.

Obiectivul acestui proiect este de a determina dacă semnalizarea ShcA-LRP controlează proliferarea celulară și de a identifica in vitro și in vivo prin ce mecanisme complexul LRP-ShcA afectează această reglementare.

Obiective

Obiectivul 1: Caracterizează in vitro rolul LRP asupra activării ShcA

Obiectivul 2: Caracterizați in vivo importanța ShcA în dezvoltarea leziunilor aterosclerotice la șoareci (șoareci deficienți în ShcA în VSMC sau șoareci deficienți în ShcA în celulele endoteliale).

Rezultate

Obiectivul 1: abordare in vitro

Prezența LRP este necesară pentru activarea ShcA ?
Pentru a răspunde la această întrebare, avem fibroblaste embrionare de șoarece în linie care exprimă LRP (MEF LRP +/+) sau cu deficit de LRP (MEF LRP -/-).
Rezultatele noastre preliminare (obținute prin fracționare celulară) arată o recrutare a ShcA la membrană în MEF LRP +/+, după stimularea celulelor de către insulină, un factor de creștere utilizând căi de semnalizare intracelulare comune cu cele ale IGF-1figura 1). În schimb, în celulele cu deficit de LRP, ShcA este deja prezent la nivelul membranei în starea bazală și trece în compartimentul citosolic după stimularea insulinei (figura 1).
Prin urmare, LRP influențează traficul intracelular de ShcA după stimularea insulinei.