Studii genetice și clinice moleculare de intoleranță la lactoză (hipolactazie) - PDF gratuit
De la Institutul de Chimie Clinică și Medicină de Laborator al Facultății de Medicină a Universității din Rostock Director: Prof. Dr. med. Peter Schuff-Werner Examinări genetice și clinice moleculare ale intoleranței la lactoză (hipolactazie) Disertație inaugurală pentru obținerea diplomei universitare de doctor în medicină a Facultății de Medicină a Universității din Rostock prezentată de Johannes Futh născut la 20 februarie 1981 la Potsdam Rostock 2008 urn: nbn: de: gbv: 28-diss2010-0009-9
Decan: Prof. Dr. med. Emil Reisinger Recenzor 1: Prof. Dr. med. Stefan Liebe (Clinica de Medicină Internă/Departamentul de Gastroenterologie/Universitatea din Rostock) Recenzorul 2: Prof. Dr. med. Hartmut Hans-Jürgen Schmidt (Experimental Transplant Hepatology/Westfälische Wilhelmsuniversität Münster) Recenzorul 3: Priv.-Doz. Dr. med. Michael Steiner (Institutul de Chimie Clinică și Medicină de Laborator/Universitatea din Rostock) Locația disertației: Rostock Ziua Apărării Publice: 27 mai 2009
Cuprins Lista figurilor Lista tabelelor Lista abrevierilor 1. Introducere.1 1.1 Sinopsis istoric. 1 1.2 Clasificarea deficitului de lactază. 2 1.3 Fiziologia și fiziopatologia malabsorbției lactozei 3 1.4 Clinica malabsorbției lactozei. 6 1.5 Diagnosticul malabsorbției lactozei. 8 1.6 Terapia malabsorbției lactozei ... 9 1.7 Deficitul primar de lactază la adult. 11 1.7.1 Epidemiologie. 13 1.7.2 Genetica moleculară 14 2. Obiectiv. 17 3. Material și metode 18 3.1 Testarea persoanelor și pacienților 18 3.2 Izolarea ADN-ului. 18 3.3 Genotipare. 19 3.3.1 PCR-RFLP. 19 3.3.2 PCR în timp real (LightCycler). 23 3.4 Test de respirație cu lactoză H2. 27 4. Rezultate. 33 4.1 Studiu epidemiologic. 33 4.1.1 Subiecte. 33
4.1.2 Genotiparea polimorfismului LCT-13910 într-o cohortă de donatori de sânge Rostock. 33 4.1.3 Genotiparea polimorfismului LCT-13910 într-o cohortă sud-coreeană. 34 4.1.4 Genotiparea polimorfismului LCT-13910 folosind PCR în timp real (LightCycler). 34 4.2 Studiu clinic. 34 4.2.1 Pacienți. 34 4.2.2 Prevalența non-producătorilor de H2. 36 4.2.3 Producători de H2: rezultatele testelor de respirație H2 și genotipare. 36 4.2.4 Non-producători de H2: constatări clinice și genotipare. 38 5. Discuție. 40 5.1 Studiu epidemiologic. 40 5.2 Studiu clinic. 47 6. Rezumat. 59 7. Bibliografie. 61 teze Declarație de independență CV Mulțumiri
Lista figurilor 1.1 Fiziologia absorbției lactozei. 5 1.2 Fiziopatologia malabsorbției lactozei. 6 3.3 Detectarea celor trei genotipuri ale polimorfismului LCT-13910. 23 3.4 Principiul transferului de energie prin rezonanță de fluorescență (FRET). 26 3.5 Ilustrația curbelor de topire alele-specifice ale polimorfismului nucleotidic unic LCT-13910. 27 3.6 Schema evaluării pe baza testului de respirație H2. 29 3.7 Schema de colectare a constatărilor cu statutul actual de non-producător H2 30 3.8 Chestionar pentru înregistrarea datelor anamnestice. 31 3.9 Jurnal de evenimente pentru înregistrarea reclamațiilor în timpul efectuării testului de respirație cu lactoză H2. 32 5.10 Prevalența deficitului primar de lactază adultă în Europa. 42
5.18 Cauze potențiale ale rezultatelor fals pozitive și fals negative ale testului de respirație H2. 51
Lista abrevierilor AC ADN dntp adenină citozină acid dezoxiribonucleic acid deoxinucleozid trifosfat EDTA acid etilendiaminetetraacetic F Forward (forward primer) FLU colorant fluorescent FRET fluorescență rezonanță transfer de energie G guanină GLUT transportator de glucoză Lactoza Lactoza Lactoza Lactoza deficiență de întreținere Na sodiu negativ (martor) ppm părți pe milion PCR polimerază reacție în lanț R invers (grund invers) restricție RFLP lungime fragment polimorfism rpm Runde pe minut (rotații pe minut) SGLT Transportor de glucoză dependent de sodiu T Timină WT tip sălbatic
Lactază intestin subțire Epiteliu intestinal subțire Tranzit intestinal Lactoză Glucoză + galactoză SGLT1 Intestin gros Epiteliu intestinal gros Sânge Lactoză H 2 O H 2 O Fermentare bacteriană Acizi grași cu lanț scurt Toxine bacteriene H 2 CO 2 Flatus Figura 1.2: Fiziopatologia malabsorbției lactozei. 1.4 Clinica de malabsorbție a lactozei Simptomele care apar după ingestia alimentelor care conțin lactoză sunt nespecifice și includ dureri abdominale, boroborygme, flatulență și diaree și, ocazional, constipație. Mai mult, au fost raportate o serie de reclamații sistemice, despre care se crede că sunt metaboliți toxici care apar în cursul metabolismului bacterian al lactozei (Tabelul 1.1). Al 6-lea
Lactoza trebuie indicată în lista ingredientelor. Conținutul mediu de lactoză al unor alimente selectate este rezumat în tabelul 1.2. Tabelul 1.2: Conținutul de lactoză din lapte și produse lactate (bazat pe Renner și Renz-Schauen 1994). Lapte sau produse lactate Conținut de lactoză (g la 100 g) Lapte de consum (lapte proaspăt, lapte UHT) 4,8-5,0 Lapte condensat (4-10% grăsime) 9,3-12,5 Zer, băuturi din zer 2.0-5, 2 lapte praf 38,0-51,5 unt 0,6-0,7 quark (10-70% grăsime în substanță uscată) 2,0 8,0 quark cu conținut scăzut de grăsimi 4,1 iaurt 3,7-5,6 tare, Brânză semidură, moale