PDF QUANTA Lite TM F-Actin IgA ELISA Numai pentru diagnostic in-vitro Complexitate CLIA înaltă - Gratuită

Scurta descriere

Descărcați QUANTA Lite TM F-Actin IgA ELISA pentru diagnostic in-vitro Complexitatea CLIA: ridicată.

quanta

Descriere

QUANTA LiteTM F-Actin IgA ELISA

Numai pentru „Diagnostic in-vitro” Complexitatea CLIA: ridicată

Utilizare intenționată QUANTA Lite ™ F-Actin IgA este un test imunosorbent legat de enzime (ELISA) pentru detectarea semi-cantitativă a anticorpilor IgA împotriva F-actinei mușchilor netezi din serul uman. La pacienții cu constatări clinice sugestive ale bolii celiace, prezența anticorpilor anti-F-actină din clasa IgA este utilizată pentru a ajuta la evaluarea probabilității de atrofie semnificativă a vilozităților.

Principiul testului Antigenul F-actină purificat prin cromatografie de afinitate a fost legat de cavitățile plăcii de microtitrare din polistiren, menținând în același timp configurația originală. Controalele prediluate și serurile pacientului diluate sunt pipetate în godeuri diferite. Anticorpii existenți ai F-actinei se leagă de antigen. Restul probei/martorului este îndepărtat prin spălare. IgA anti-uman marcat cu enzime este pipetat în godeuri și se leagă de anticorpul pacientului în timpul unei a doua incubații. După ce conjugatul rămas a fost îndepărtat într-o altă etapă de spălare, se adaugă un substrat cromogen. Intensitatea reacției de culoare rezultată este măsurată după oprirea cu fotometrul cu placă de microtitrare. Evaluarea cantitativă se realizează prin compararea valorilor de dispariție ale pacienților cu valoarea unui calibrator.

Conținutul pachetului de testare 1. 2. 3. 4. 5. 6.

Placă de microtitrare ELISA acoperită cu antigen F-actină foarte purificat (12-1 x 8 godeuri), cu suport pentru benzi în ambalaj din folie și control negativ ELISA desicant, 1 sticlă de tampon cu stabilizator și ser uman fără anticorpi umani împotriva F-actinei, pre-diluată gata de utilizare, 1, 2 mL F-Actin IgA ELISA Low Positive (calibrator), 1 sticlă de tampon cu stabilizator și ser uman cu anticorpi împotriva F-Actin, gata de utilizare pre-diluată, 1,2 mL F-Actin IgA ELISA High Positive (control pozitiv), 1 sticlă de tampon cu stabilizator și ser uman cu anticorpi împotriva F-actinei, gata de utilizare pre-diluată, 1,2 mL diluant de probă HRP, 1 sticlă - de culoare roz cu soluție salină tamponată Tris, Tween 20, stabilizatori și conservanți ai proteinelor, 50 mL concentrat de spălare HRP, 1 sticlă cu concentrat 40x - Colorat în roșu cu soluție salină tamponată și Tween 20, 25 ml. Pentru diluare, vă rugăm să consultați capitolul corespunzător din instrucțiuni. 1

Conjugat HRP IgA, (capră), IgA anti-umană, 1 flacon - colorat galben cu tampon, stabilizatori de proteine ​​și conservanți, 10 ml TMB cromogen, 1 flacon cu stabilizatori, 10 ml soluție stop HRP, acid sulfuric 0,344 M, 1 flacon - incolor, 10 mL

Precauții 1. 2. 3. 4.

Păstrați toți reactivii kitului la 2-8 ° C. Nu înghețați. Reactivii sunt stabili până la sfârșitul datei de valabilitate, dacă sunt depozitați și manipulați conform instrucțiunilor. Întoarceți benzile de microfon neutilizate la ambalajul original, sigilați-le etanș și puneți-le înapoi în frigider. Tamponul de spălare diluat este stabil timp de o săptămână la 2-8 ° C.

Probele Testul trebuie efectuat cu probe de ser. Adăugarea azidelor sau a altor stabilizatori la probele de ser poate afecta negativ rezultatele. Probele care sunt contaminate microbacterial, hemolitice, lipemice sau inactivate de căldură nu trebuie utilizate. După prelevarea sângelui, serul trebuie separat de sânge. Documentul NCCLS H18-A3 recomandă următoarele condiții de depozitare pentru probele de pacienți: 1) Nu depozitați probele la temperatura camerei mai mult de 8 ore. 2) Dacă testul nu poate fi efectuat în decurs de 8 ore, depozitați probele într-un loc răcoros la 2-8 ° C. 3) Dacă testul nu poate fi efectuat în 48 de ore, proba trebuie să fie înghețată la -20 ° C sau mai puțin. Probele congelate trebuie agitate bine după decongelare și înainte de testare 29 2

Procedura de testare Materialul prezent în trusa de testare 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Placă de microtitrare F-Actin ELISA (12-1 x 8 godeuri), cu suport pentru benzi 1,2 mL control ELISA negativ prediluat 1,2 mL F-Actină IgA ELA control pozitiv scăzut 1,2 mL F-actină IgA ELA control pozitiv ridicat 50 mL diluant probă HRP 25 mL concentrat de spălare HRP, concentrat de 40 de ori 10 mL conjugat HRP IgA (de la capră), IgA anti-uman 10 mL TMB cromogen 10 mL soluție stop HRP, acid sulfuric 0,344 M

Material suplimentar necesar Pipete pentru 5, 100, 200-300 și 500 µL pipete de unică folosință Flacoane de reacție Eppendorf pentru diluarea serică, 4 ml volum de apă distilată sau deionizată Flacon de 1 L pentru concentrat de spălare HRP diluat Cititor pentru plăci de microtitrare cu filtru de 450 nm (și 620 nm pentru o măsurare bicromatică)

Metoda de pregătire a testului 1. 2.

Aduceți toți reactivii și probele la temperatura camerei (20-26oC) și amestecați bine. Înlocuiți întregul conținut (25 ml) concentrat de spălare cu 975 ml apă distilată. se amestecă (diluare 1:40). Soluția tampon diluată este stabilă timp de o săptămână la 2-8 ° C. Dacă întreaga placă de microtitrare nu trebuie utilizată simultan, se pot adăuga 2 ml concentrat cu 78 ml apă distilată pentru o preparare de 16 godeuri. fi amestecat. Se diluează probele de ser 1: 101 prin amestecarea a 5 µl de ser cu 500 µL de diluant de probă gata de utilizare. Probele diluate trebuie testate în decurs de 8 ore. Nu diluați F-Actin IgA ELISA Control pozitiv scăzut, F-Actin IgA ELISA Control pozitiv ridicat și ELISA Control negativ. Fiecare test necesită două godeuri pentru fiecare dintre cele trei controale și unul sau două godeuri pentru eșantionul pacientului (se recomandă ca toate eșantioanele să fie preparate în duplicat până se atinge precizia și reproductibilitatea necesare).

F-Actin IgA ELISA Low Positive Control, F-Actin IgA ELISA High Positive Control și ELISA Negative Control trebuie efectuate împreună cu fiecare test de testare pentru a se asigura că toți reactivii și testul de testare funcționează corect. Deoarece F-Actin IgA ELISA Control pozitiv scăzut, F-Actin IgA ELISA Control pozitiv ridicat și ELISA Control negativ sunt prediluate, etapa de diluare a probei pacientului nu este necesară pentru controale. Controalele suplimentare pentru asigurarea calității pot fi efectuate în conformitate cu liniile directoare naționale sau terțe

autoritățile internaționale de reglementare sau acreditare. Controalele adecvate pot fi obținute din serul uman și testate la 25

Negativ Îndoit Pozitiv 1. 2. 3.

Un rezultat pozitiv anti-F-actină IgA la pacienții cu boală celiacă indică o probabilitate crescută de atrofie severă a vilozităților. Un rezultat negativ indică absența anticorpilor F-actină IgA sau concentrații sub limita de detecție a sistemului de testare. Vă sugerăm să adăugați următoarea notă la rezultatele de laborator: „Următoarele rezultate au fost obținute cu INOVA QUANTA LiteTM F-Actin IgA ELISA. Valorile IgA de F-actină care au fost determinate folosind sisteme de testare de la alți producători nu pot fi schimbate. Nivelul titrului IgA găsit nu poate fi corelat cu un titru al punctului final. "

Limitări ale procedurii 1. 2. 3. 4.

Complexele imune sau alte agregate de imunoglobulină din serul pacientului pot provoca legare nespecifică și rezultate fals pozitive. Nu toți pacienții celiaci sunt pozitivi pentru anticorpii F-actină IgA. Nu toate specimenele SMA pozitive au anticorpi F-actină IgA. Detectarea anticorpilor F-actină-IgA la pacienții cu afecțiuni hepatice trebuie interpretată cu precauție, deoarece prezența anticorpilor F-actină-IgG în acest grup de boli este adesea asociată cu anticorpii F-actină-IgA, care pot să nu fie înrudiți stai cu patologia intestinală. Anticorpii Ig-F-actină trebuie măsurați numai la pacienții cu boală celiacă, ca un ajutor în evaluarea leziunilor intestinale. Rezultatele acestui test trebuie utilizate împreună cu rezultatele clinice și alte teste serologice. Caracteristicile de performanță pentru alte specimene decât serul nu au fost determinate. Al 4-lea

Date de performanță Valori așteptate Interval normal Un panou de 500 de probe de la persoane aparent sănătoase (250 de bărbați și 250 de femei) a fost testat cu trusa QUANTA LiteTM F-Actin IgA ELISA. Vârsta a fost cuprinsă între 18 și 80 de ani (mediană = 41). Specificitatea testului a fost de 92,2% (461/500). 3 din cele 39 de probe s-au dovedit a fi pozitive pentru anticorpii tTG-IgA, deci aceștia ar putea fi pacienți nediagnosticați cu boală celiacă. Unul dintre aceste trei eșantioane a fost, de asemenea, endomisiu pozitiv și este practic sigur că este un caz celiac. Prevalența bolii celiace în rândul populației normale din SUA a fost estimată la 1 din 133; prin urmare, dovezile pacienților nediagnosticați cu boală celiacă în cohorta normală nu sunt, prin urmare, neașteptate

Sensibilitate și specificitate clinică Deoarece testul QUANTA Lite ™ F-Actin IgA este destinat să fie utilizat pentru a evalua probabilitatea de deteriorare a intestinului la pacienții cu boală celiacă, sensibilitatea și specificitatea au fost determinate pe baza a 445 de eșantioane cu rezultate de biopsie. Dintre cele 445 de probe, 157 au prezentat patologie de tip 3 și 288 de tip 0, 1 sau 2 conform Marsh.27 N = 445 Marsh notch F-actin IgA units M3a/b/c M0, M1, M2 total amount Pos (> 24, 9 unități) 76 14 90 Neg (24,9 unități) 60 30 90 Neg (