Reducerea grâului alimentar scade nivelul deoxinivalenol urinar la adulți

grâului

  • Abstract
  • introducere
  • Metodele
  • Studierea designului
  • Jurnalul alimentar
  • Extracție DON urinară
  • Analiza LC-MS a DON extras
  • Analiza creatininei
  • Analize statistice
  • Rezultate
  • Discuţie
  • Glosar

Abstract

Metodele

Studierea designului

Studiul a avut loc pe o perioadă de 7 zile și a implicat 25 de voluntari, inclusiv 16 femei și 9 bărbați, cu vârste cuprinse între 21 și 59 de ani. În zilele 1 și 2 („dietă normală”), s-au ținut jurnale alimentare semi-cântărite și în ziua 3, s-a obținut o primă probă de urină goală dimineața. În zilele 3-6 („intervenție redusă la grâu”), voluntarilor li s-a cerut să limiteze lista produselor alimentare care pot conține grâu (pâine, prăjituri, paste, cereale pentru micul dejun etc.) și să le înlocuiască cu articole din această listă. alternative sugerate (de exemplu, orez, cartofi). Jurnalul alimentar zilele 5 și 6 au fost păstrate din nou și o primă probă de urină goală dimineața a fost obținută în ziua 7. A fost obținut consimțământul informat de la toți voluntarii înainte de studiu și s-a obținut aprobarea etică obținută de la NHS Research Ethics Board, Bradford, REGATUL UNIT. .

Jurnalul alimentar

Jurnalele alimentare au fost complet codificate utilizând un software intern de analiză a alimentelor bazat pe Microsoft Access, care utilizează Compoziția britanică a alimentelor (Holland și colab., 1992). Pentru a evalua conformitatea cu intervenția, am comparat frecvența consumului anumitor grupuri de alimente (pâine, prăjituri, cereale pentru micul dejun și paste) în timpul unei diete normale (zilele 1 și 2) cu cea a intervenției (zilele 5 și 6). În plus, au fost estimate greutățile anumitor produse alimentare și s-a determinat consumul de alimente pe bază de grâu pentru fiecare individ pe baza principalelor surse de grâu (pâine, cereale pentru micul dejun, chifle, paste, prăjituri și multe altele. Fursecuri). Alte surse de grâu se găsesc în dietă, cum ar fi sosurile și îngroșătorii. Cu toate acestea, contribuția lor la aportul total de grâu a fost estimată a fi de o importanță relativ mică.

Extracție DON urinară

DON urinar total a fost măsurat utilizând o modificare a metodei lui Meky și colab. (2003) și utilizarea 13 C-DON (Biopure Referenzsubstanzen, Tulln, Austria) ca SI. IS a fost un amestec conținând în principal 13 C 15-DON (greutate moleculară (M) 311), dar și 13 C 14-DON (M. 310; 16,8%). Adecvarea acestui compus ca IS în analiza LC-MS/MS a cerealelor contaminate cu DON a fost recent stabilită (Haubl și colab., 2006).

În analiza noastră de urină, probele au fost centrifugate (2000g; 15 min; 4 ° C) și la 4 ml urină, s-a adăugat SI pentru a da o concentrație finală de 5ng/ml. PH-ul fiecărei probe a fost ajustat la 6, 8 și 23.000 U de β-glucuronidază (tip IX-A din Escherichia coli; Sigma) în 1 ml de KH 2 PO 4 75 mM au fost incubate într-o baie de apă la agitare timp de 18 ore . la 37 ° C. După digestie, probele au fost centrifugate (2000g; 15 min; 4 ° C) și supernatantul a fost diluat la 16 ml cu PBS (pH 7,2). Materialul diluat a fost trecut prin coloane de imunoaffinitate DONtest ​​(Vicam, Watertown, MA, SUA) pentru a extrage DON conform instrucțiunilor producătorului. DON a fost eluat din coloane cu 4 ml de metanol și extractele au fost uscate în vid folosind un Savant Speed ​​Vac și reconstituite în 250 pl de etanol 10% (v/v) pentru analiză. Două alicote ale unei probe de urină cu niveluri cunoscute de DON au fost, de asemenea, marcate cu SI și analizate cu fiecare lot de probe testate ca control al calității (QC).

Analiza LC-MS a DON extras

DON a fost analizat prin HPLC (Waters 2795 Separation Module, Milford, MA, SUA) cu detectarea prin SM (spectrometru de masă Micromass Quattro Micro triplu quadrupol, Manchester, Marea Britanie). Separarea DON a fost realizată folosind o coloană Luna C18 (150 × 4,6 mm, dimensiunea particulelor de 5 µm (Phenomonex, Macclesfield, Marea Britanie). Faza mobilă a fost începută cu 20% metanol și supusă unui tratament izocromatic timp de 10 minute O fază de spălare timp de 6 minute Un minut a fost apoi realizat cu 75% metanol, după care 20% metanol a fost reintrodus prin echilibrarea sistemului la această concentrație pentru încă 11 minute, debitul fiind de 1 ml/min și volumul de injecție de 25 μl. eluantul din coloana HPLC a fost direcționat în camera de desolvatare a SM și restul a fost trimis la evacuare.