SERVALight EosUltra Western Blot Chemiluminescence HRP Substrate Kit - PDF Descărcare gratuită

MANUAL DE UTILIZARE SERVALight EosUltra Western Blot Chemiluminescence HRP Substrat Kit (Nr. Cat. 42586) SERVA Electrophoresis GmbH Carl-Benz-Str. 7 D-69115 Heidelberg Telefon + 49-6221-138400, Fax + 49-6221-1384010 e-mail: [email protected] http://www.serva.de

western

Cuprins 1. SERVALIGHT EOSULTRA 2 1.1. Informații generale 2 1.2. Componentele kitului 2 1.3. Condiții de depozitare 2 2. Efectuarea detecției 3 2.1. Important la început 3 2.2. Materiale și soluții necesare, care nu sunt furnizate 4 2.3. Schema de detectare Western blot 5 2.4. Protocol 5 3. SOLUȚII DE PROBLEME 7 4. ORDONARE DE INFORMAȚII 8 Ver 03/12 1

1. SERVALight EosUltra 1.1. Informații generale SERVALight EosUltra este un substrat chimiluminiscent foarte sensibil pentru detectarea conjugatului de peroxidază de hrean (HRP), de ex. anticorpi marcați pe imunobloti. Intensitatea semnalului substratului permite detectarea antigenului în intervalul inferior de femtogramă (10-15). Avantaje: Detecție pe filme sau cu sisteme de documentare adecvate pentru chimioluminiscență, de ex. ProXima C16Phi +, Isogen Timpi de expunere foarte scurți și/sau diluții mai mari de anticorpi datorită semnalelor optimizate, cu intensitate luminoasă SERVALight EosUltra nu este potrivit pentru utilizare în diagnostice sau alte aplicații clinice, ci doar pentru cercetare și dezvoltare. SERVALight este fabricat de Cyanagen Srl. Cyanagen Srl este supusă următoarelor brevete SUA și UE US 7803573, EP 1962095, US 7855287, precum și brevete deja depuse și valabile pentru alte țări. 1.2. Componentele kitului nr. Soluție SERVALight EosUltra Luminol SERVALight Soluție EosUltra Peroxid 42586.01 10 ml 10 ml 42586.02 50 ml 50 ml 42586.03 100 ml 100 ml 1.3. Condiții de depozitare Păstrați kitul la 2 8 C. Dacă este depozitat la temperatura recomandată, acesta poate fi utilizat cel puțin până când: a se vedea eticheta. 2

2.3. Schema de detectare Western Blot de electroforeză cu gel de blocare a transferului de incubare 1. Incubare de anticorpi 2. Anticorp SERVALight EosUltra Incubation Detection 2.4. Protocol (1) Scoateți pata din aparatul de pete și apoi blocați-o la temperatura camerei (20-60 min) sau la 2-8 ° C peste noapte. (2) Îndepărtați reactivul de blocare și adăugați prima soluție de lucru a anticorpului într-o diluție adecvată. Incubație timp de 1 oră la temperatura camerei sau peste noapte la 2-8 C cu agitare. (3) Spălarea ulterioară a membranei cu tampon de spălare (5 min). Repetați pasul de spălare de 4-6 ori. Volumele tampon mai mari sau numărul de pași de spălare pot ajuta la reducerea fundalului. (4) Adăugați diluarea adecvată a conjugatului HRP. 1 h incubare a petei la temperatura camerei cu agitare. (5) Repetați pasul (3). (6) Înainte de detectare, soluțiile de detectare trebuie să fie la temperatura camerei. (7) Pregătiți soluția de lucru a substratului amestecând proporții egale de soluție de peroxid cu soluție de luminol. Ar trebui să se utilizeze 0,1 ml de soluție de lucru pe cm2 de membrană. 5

(8) Soluția de lucru este stabilă timp de 24 de ore la temperatura camerei. (9) 5 min de incubație a membranei blot cu soluție de lucru substrat. (10) Transferați pata protejată (de exemplu, înfășurați în folie alimentară fără bule de aer) în caseta de film cu partea proteică în sus și introduceți filmul. Aici ar trebui să lucrați într-o cameră întunecată adecvată. Folia trebuie să rămână uscată în timpul expunerii. IMPORTANT: Substratul în exces trebuie îndepărtat din pete. Folia trebuie așezată cu atenție, deoarece datorită intensității semnalului, chiar și o ușoară alunecare a filmului/petei poate duce la semnale neclare sau incorecte. (11) În primul rând, se recomandă un timp de expunere de 60 s. În funcție de puterea semnalului, timpul de expunere suplimentar pentru intensitatea optimă a semnalului poate fi selectat în consecință. (12) Filmul expus este apoi dezvoltat. (13) Ca alternativă la dezvoltarea filmului, detectarea poate fi efectuată și utilizând sisteme de documentare adecvate, de ex. ProXima C16 Phi +, Isogen. (14) Dacă este necesar, pata poate fi decupată după detectare și reîncărcată cu anticorpi. Al 6-lea

4. Informații de comandă pentru membrane Cat. Immobilon (PVDF), 26,5 cm x 3,75 m, dimensiunea porilor: 0,2 µm (1 rolă) 42574 Fluorobind (PVDF), 10 x 10 cm, dimensiunea porilor: 0,2 µm (20 coli) 42573 Fluorobind (PVDF) ), 25 cm x 3 m, dimensiunea porilor: 0,2 µm (1 rolă) 42571 Protein Standard SERVA Western Blot Protein Standard 39256 Reactivi Tween 20 37470 Detecție Reactivi/Kituri Reactiv de chimiluminescență pentru peroxidă de hrean 42582 SERVALight Polaris CL HRP WB Substrat Kit 42584 SERVALight Eos CL HRP WB Substrat Kit 42585 SERVALight Helios CL HRP WB Substrat Kit 42587 8