STUDIUL FUNCȚIILOR DE DEZVOLTARE ȘI METABOLICE ALE RECEPTORULUI NUCLEAR DE FETOPROTEINE

STUDIUL DANIEL MALENFANT AL FUNCȚIILOR DE DEZVOLTARE ȘI METABOLICE ALE FACTORULUI DE TRANSCRIPȚIE A RECEPTORULUI NUCLEAR DE FETOPROTEINE (FTF) Teza prezentată la Facultatea de Studii Postuniversitare și Postdoctorale din cadrul Universității Laval ca parte a programului de doctorat în biologie celulară și moleculară pentru a obține diploma (Dr.) FACULTATEA DE MEDICINĂ UNIVERSITÉ LAVAL QUÉBEC 2012 Daniel Malenfant, 2012

Cuvânt înainte Am vrea să-i mulțumesc dr. Luc Bélanger pentru că mi-a permis să-mi desfășor activitatea de cercetare în laboratorul său, precum și pentru sprijinul său financiar pe parcursul studiilor mele postuniversitare. Mulțumesc, de asemenea, dr. Jacques Côté și Génome Québec pentru finanțarea unei părți a cercetării mele doctorale. Mulțumim lui Alain-Roger Bataille și Éric Paquet pentru implicarea lor directă în achiziția și analiza datelor prezentate în capitolul 3 al acestei teze. Un mare mulțumire tuturor persoanelor care au lucrat în laboratorul Dr. Bélanger în timpul studiilor mele postuniversitare, în special Sylvie Roy, Denis Allard, Frédéric St-Pierre, Alain Lamontagne, Julie Poulin, Chantal Courtemanche, Jean-François Paré și Mariève Jacob -Wagner . Mi-au oferit sprijin moral și imoral și mi-au înveselit zilele. În cele din urmă, vă mulțumesc tuturor celor cu care am jucat fotbal, am urcat și, în special, echipei mele de bărci dragon "Les Barbares de Québec" pentru ore de distracție și de a vă depăși. Îmi place foarte mult să fiu în preajma ta și să depășesc limitele cu tine.

„Răbdarea și durata timpului sunt mai mult decât forță sau furie” -Jean De la Fontaine

Cuprins Rezumat executiv. i Rezumat. ii Cuvânt înainte. iii Cuprins. v Lista tabelelor. vii Lista figurilor. viii Lista abrevierilor. ix Capitolul 1 Introducere. 1 1.1 Ficatul. 2 1.1.1 Arhitectură. 2 1.1.2 Dezvoltare. 6 1.1.3 Funcții. 9 1.1.4 Boli hepatice și cancer. 15 1.2 Transcriere. 18 1.2.1 Generalități. 18 1.2.2 Elemente de reglementare. 23 1.2.3 Factori de transcriere. 27 1.3 Transcrierea ficatului. 30 1.3.1 Factorul nuclear al hepatocitelor (HNF). 31 1.3.2 Proteina de legare CAAT/amplificator (C/EBP). 34 1.3.3 Receptorii nucleari. 37 1.3.4 Alți factori. 43 1.4 FTF (Factor de transcriere a fetoproteinelor). 44 1.4.1 Generalități. 44 1.4.2 Structură și activitate. 46 1.4.3 Promotori. 48 1.4.4 Expresia țesutului. 50 1.4.5 Funcția. 51 1.5 Scopul cercetării doctorale. 54 Capitolul 2 Gena Factorului de transcripție a fetoproteinelor (FTF) este esențială pentru embriogeneză și homeostazie a colesterolului și este reglată de un element DR4. 56 2.1 Cuvânt înainte. 57 2.2 Rezumat. 57 2.3 Rezumat. 58 2.4 Introducere. 59 2.5 Procedura experimentală. 60 2.5.1 Inactivarea genei FTF. 60 2.5.2 Hibridizare in situ. 62 2.5.3 Activitatea LacZ. 62 2.5.4 Analiza Microarray. 63 2.5.5 Northern Blots. 63 2.5.6 PCR cantitativă. 63 2.5.7 Schimbarea electromobilității și teste Scatchard. 64 2.5.8 Western Blots. 65

Lista tabelelor Tabelul 2.1: Genotipuri de embrioni (E, zi embrionară) de la șoareci FTF +/- încrucișați. 72 Tabelul 2.2: Nivelurile colesterolului seric la șoareci de tip sălbatic (+/+) și FTF-haploizi (+/-) hrăniți cu o dietă de control sau cu o dietă de colesterol 2% timp de 5 zile. 73 Tabelul 2.3: Analiza microarray a expresiei genelor hepatice la șoareci masculi Ftf +/- adulți. 75 Tabel 3.1: Țintele genei FTF legate de mitocondriile din ficatul adult de șoarece. 98 Tabelul 3.2: FTF potențiali parteneri transcripționali. 99

xv TR receptor tiroidian TRE hormon tiroidian element de răspuns trna transfer ARN TSS transcriere start site (site de inițiere a transcrierii) UTP uridină trifosfat UTR regiune netradusă VDAC1 canal anion dependent de tensiune 1 VDR receptor vitamina D (NR1I1) (receptor vitamina D) VLDL densitate foarte mică lipoproteine (lipoproteine cu densitate foarte mică) greutate/volum greutate/volum (greutate/volum) WNT tip fără aripi familie sit de integrare MMTV wt tip sălbatic (sauvage) X-gal 5-brom-4-clor-3-indolil-beta-D -galactopiranozidă XRCC5 ADN helicază II dependentă de ATP (reparații cu raze X care completează reparația defectă în celulele de hamster chinez 5)

Capitolul 1 Introducere

4 Figura 1.1: Morfologia ficatului. Centru: anatomia generală a ficatului uman. Inserții: A) Lobulul hepatic B) Sistemele vasculare și biliare: 1- Ramificația venei porte; 2- Ramura arterei hepatice; 3- Canal biliar; 4- Placă de limitare; 5- Vena centrilobulară; 6- Pereții celulari hepatici; 7- Sinusoide; Săgeată roz: flux de sânge; Săgeata verde: fluxul biliar (între cutii); Cutie: 8- canaliculus biliar; 9- Canalul Hering; 10- Ductula biliară C) Sinusoidală: 11- Celule stelare; 12- Lumina capilarelor sinusoidale; 13- Spațiul Dissei; 14- Canaliculus biliar; 15- Hepatocite; 16- joncțiune strânsă; 17- Celule Küpffer; 18- Celula endotelială a sinusoidelor hepatice. Adaptat de pe www.embryologie.ch și manualul Merck de informații medicale - ediția a doua de acasă, versiunea online 1.1.1.4 Zonare Deși dispunerea hepatocitelor pare uniformă, există o zonare funcțională a lobulilor pe baza poziției vaselor de sânge adică ramurile terminale ale portalului și venelor centrilobulare și direcția fluxului sanguin (revizuită în