Utilizări posibile ale citometriei în flux folosind FACS - LABOKLIN GMBH; LABORATOR CLINIC

Abrevierea FACS înseamnă fluorescențăActivat cel orting. Aceasta este o formă specială de citometrie în flux în care celulele marcate cu fluorescență pot fi măsurate și analizate. Celulele curg într-un curent de lichid printr-un fascicul laser și sunt determinate dimensiunea celulei, structura internă și intensitatea relativă a fluorescenței. Există anticorpi marcați cu fluorescență disponibili pentru numeroase tipuri de celule, în special limfocite, care sunt direcționate împotriva caracteristicilor suprafeței imunofenotipice (grup de diferențiere, prescurtat în "CD") a celulelor. Folosind acești markeri CD, celulele pot fi acum examinate și identificate mai atent. De exemplu, limfocitele cu celule T citotoxice sunt pozitive pentru CD3 și CD8, dar negative pentru CD21 și CD4.

folosind

Această examinare este utilizată în diagnosticul de rutină, în special în hematologie. Deoarece materialul de testat trebuie să fie sub formă lichidă, probele de sânge sunt deosebit de potrivite. Pentru a asigura un rezultat semnificativ, este important ca celulele să fie intacte, de aceea examinarea trebuie efectuată cât mai curând posibil, în maximum 3 zile. La LABOKLIN dispozitivul FACS este utilizat pentru diferite examinări importante.

1. Anticorpii plachetari

Creșterea imunoglobulinei (predominant IgG) pe suprafața trombocitelor duce la fagocitoza prematură a trombocitelor de către macrofage cu consecința trombocitopeniei. Această trombocitopenie mediată imun (IMT) poate fi primară sau secundară. Forma primară rară este cauzată de autoanticorpi care sunt direcționați către epitopii specifici trombocitelor. Trombocitopenia secundară mediată prin imunitate, pe de altă parte, este asociată cu diferite medicamente, agenți infecțioși (bacterii, viruși, protozoare sau heminti), neoplazie și alte boli mediate de imunitate.

IMT primar este observat predominant la câini, de două ori mai des la femele decât la câinii masculi, la toate grupele de vârstă, dar cel mai frecvent la animalele de vârstă mijlocie. Rasele predispuse sunt Cocker Spaniel, Miniature și Toy Poodle, Old English Shepherd Dog (Bobtail), Golden Retriever și German Shepherd Dog.
Numărul de trombocite măsurat este de obicei mai mic de 30 G/l cu IMT primar decât cu forma secundară.

Diagnosticul poate fi efectuat folosind FACS folosind detectarea anticorpilor plachetari. Se efectuează o dublă incubație pentru a detecta IgG legat de trombocite. Nivelul anticorpilor de 30% este evaluat ca dovadă pozitivă pentru IMT. Materialul eșantion (sânge integral EDTA) nu trebuie să fie mai vechi de 3 zile pentru a obține o imunocolorare evaluabilă. Examinarea trebuie inițiată înainte de începerea terapiei imunosupresoare, altfel vor apărea rezultate fals negative. Alte opțiuni de diagnostic sunt terapia de diagnostic cu cortizon și detectarea hiperplaziei megacariocitare în măduva osoasă.

2. Starea imunitară celulară

Starea imunitară celulară include un număr total de sânge, precum și determinarea numărului relativ și absolut de limfocite periferice: celule B, celule T totale, precum și CD4 + (celule T helper) și CD8 + (celule T citotoxice).

Imunofenotiparea sângelui se bazează pe recunoașterea selectivă a antigenelor de suprafață celulară de către anticorpi monoclonali fluorescenți marcați cu colorant folosind citometrie în flux (FACS). Examinarea stării imune celulare este indicată dacă simptomele clinice sugerează o tulburare primară sau secundară în sistemul imunitar celular.

La câini, stabilirea unei stări imune poate fi utilă în diagnosticarea piodermei, demodicozei, lupusului eritematos sistemic și leishmaniozei și a defectelor congenitale ale celulelor T. Examinările ulterioare pot fi utilizate în terapia medicamentoasă pentru control și ajustarea dozei.
La cai, este folosit pentru a clarifica infecțiile frecvente și prelungite.

Determinarea stării imune joacă un rol special în infecția cu virusul imunodeficienței feline (FIV).

Virusul provoacă infecții cronice, persistente, cu evoluția progresivă a bolii. Infecția celulelor imunocompetente epuizează treptat sistemul imunitar.

Virusul prezintă un tropism marcat pentru limfocitele T și macrofage. În principal afectate de leziuni sunt funcțiile limfocitelor T, predominând defecte cantitative și calitative în populația de celule T helper. În primul rând, o creștere a celulelor CD8 + duce la o scădere procentuală a numărului de celule CD4 +. Numărul de celule CD8 + rămâne crescut în perioada asimptomatică de infecție și scade relativ puțin înainte de apariția simptomelor clinice. La începutul infecției, celulele CD4 + sunt infectate în principal; aici se găsesc cele mai mari cantități de virus. Pe măsură ce infecția progresează, o scădere absolută a celulelor CD4 + duce la o reducere a coeficientului CD4 +/CD8 +.

Apărarea imună umorală prezintă leziuni în funcția sa relativ târziu. O scădere a numărului de celule B are loc de obicei numai în etapa finală. Cantitatea de virus din sânge crește din nou semnificativ, dar un răspuns la anticorpi nu mai are loc.

Prin urmare, crearea unui statut imunitar poate oferi o evaluare a prognosticului în prezența unui deficit imun primar sau secundar.

3. Diferențierea leucemiei

Cu o limfocitoză> 30 G/l sau cu o boală limfoproliferativă (leucemie, limfom stadiul V) confirmată prin testarea clonalității (PARR) cu un număr minim de leucocite> 5 G/l, se poate efectua o diferențiere a leucemiei folosind FACS. Prin utilizarea markerilor CD pentru identificarea celulelor, această examinare poate fi utilizată pentru a clasifica leucemia acută sau cronică (CD34: marker de celule stem), care poate oferi informații importante despre prognosticul și alegerea terapiei. Mai mult, celulele neoplazice pot fi împărțite în celule B și limfocite și subtipuri de celule T.