De la clinica pentru copii și ambulatoriu pentru copii din Dr.
De la clinica pentru copii și ambulatoriu pentru copii din Dr. Spitalul de copii von Hauner al Universității Ludwig Maximilians din München Director: profesor Dr. med. Dr. h.c. D. Reinhardt Comparația a patru ELISA pentru anticorpii IgA împotriva transglutaminazei țesuturilor umane și anticorpilor anti-gliadină IgA și IgG și validarea unui test comercial pentru detectarea anticorpilor secretori IgA împotriva transglutaminazei și gliadinei umane în scaun Disertație pentru obținerea unui doctorat în medicină la facultatea de medicină al Universității Ludwig Maximilians din München Trimis de Veronika Diehl din München 2009
Cu aprobarea Facultății de Medicină a Universității din München Raportor: Prof. Dr. S. Koletzko Coraportor: Priv. Doza. Dorit Nägler Prof. Dr. R. Zachoval Prof. Dr. Dr. h.c. Dietrich Seidel Co-supraveghere de către angajatul doctor: Dr. M. Kappler Dean: Prof. Dr. med. Dr. h.c. M. Reiser, FACR, FRCR Ziua examenului oral: 12.03.2009
1 Cuprins 1. Introducere. 4 1.1 Bazele bolii celiace. 4 1.1.1. Definiție. 4 1.1.2. Prevalența bolii celiace. 4 1.1.3. Tablou clinic. 4 1.1.4. Grupuri de risc. 5 1.2. Istoria bolii celiace. 6 1.2.1. Denumire. 6 1.2.2. Etiologie și terapie. 6 1.2.3. Fiziopatologie și diagnostic. 7 2. Obiectivul lucrării. 10 3. Material și metode. 11 3.1. Design de studiu. 11 3.1.1. Serologie. 11 3.1.2. Scaun. 12 3.2. Evaluarea statistică. 12 3.2.1. Bazele statistice. 13 3.2.2. Corelarea măsurătorilor duble. 14 3.3. Colectiv de pacienți. 14 3.3.1. Serologie. 14 3.3.2. Scaun. 14 3.4. Prelevarea de probe. 14 3.4.1. Biopsie. 14 3.4.2. Serologie. 15 3.4.3. Scaun. 15 3.5. Histologie. 15 3.6. Executarea testului. 16 3.6.1. principiile generale de testare ale investigațiilor. 16 3.6.2. Material. 17 3.7. Descrierea testelor serologice. 19 3.7.1. Test de site-ul obligatoriu. 19 3.7.2 Test biomed. 21 3.7.3 Test de Eurospital. 23
2 3.7.4. Testul Pharmacia. 25 3.8. Test de catedră de către compania Immundiagnostik. 26 4. Rezultate. 27 4.1. Determinarea anticorpilor în ser. 27 4.1.1. Grupul de pacienți. 27 4.1.2. Criterii de includere. 29 4.1.3. Distribuția vârstei. 30 4.1.4. Rezultatele examinării histologice. 30 4.1.5. Rezultatele testelor. 31 4.1.6. Compararea rezultatelor testelor. 38 4.2. Determinarea anticorpilor în scaun. 45 4.2.1. Grupul de pacienți. 45 4.2.2. Distribuția vârstei. 46 4.2.3. Rezultatul testului. 47 4.2.3.1. Rezultatele studiului retrospectiv. 47 4.2.3.2. Rezultatele studiului prospectiv. 50 5. Discuție. 53 5.1. Serologie. 53 5.1.1. Grupul de pacienți. 53 5.1.2. Distribuția vârstei. 56 5.1.3. Deficit de IgA. 57 5.1.4. Probleme metodologice în efectuarea testului. 58 5.1.5. Rezultate. 59 5.1.6. Discutarea producătorilor individuali. 61 5.1.7. Variabilitatea intra-test. 66 5.1.8. Variabilitatea inter-test. 67 5.2. Scaun. 68 5.2.1 Grupul de pacienți. 68 5.2.2. Colectarea și prelucrarea probelor. 68 5.2.3. Rezultate. 69 6. Concluzie. 71 6.1. Serologie. 71 6.2. Examinarea scaunului. 71 7. Rezumat. 72
3 7.1. Introducere. 72 7.2. Metode. 72 7.3. Rezultate. 73 7.3.1. Rezultate serologice. 73 7.3.2. Rezultatele examinării scaunului. 73 7.4. Concluzii. 73 8. Anexă. 75 8.1. Bibliografie. 75 8.2. Lista de abrevieri. 89 8.3. Ziua Recunoștinței. 90 8.4. Relua. 91
18 Bindazyme Human Anti Gliadin IgA EIA Kit, The Binding Site, Birmingham, England Bindazyme Human Anti Gliadin IgG EIA Kit, The Binding Site, Birmingham, England Bindazyme Human Anti Tissue Transglutaminase EIA Kit, The Binding Site, Birmingham, England Monkey Kit IFA pentru esofag, The Binding Site, Birmingham, Anglia Spălător automat de plăci cu microtitrare Cititor de plăci cu microtitrare (405 și 450 nm) microscop cu fluorescență cu filtru de excitație 495 nm și filtru barieră de 515 nm Pipete de precizie 10 µl, 50 µl, 100 µl, 1000 µl 3.6.2.2. Examinarea scaunului siga ELISA, compania Immundiagnostik AG, Bensheim, Germania Gliadin siga ELISA, compania Immundiagnostik AG, Bensheim, Germania Vortex mixer Cititor de plăci Microtiter cu filtru de 450 nm Agitator de plăci Microtiter Centrifugă, de 3000 ori g Pipete de precizie cu volume variabile de 10-1000 µl tuburi de sticlă sau plastic standard
21 Rezultatul și valoarea limită Tab. 3: Valorile limită ale EMA utilizate de noi ca parte a analizei rezultatelor (pe baza valorilor limită utilizate în alte studii) EMA negativ 15 - 15 - 15 - 40 U/ml Tab. 6: Specificat de producător (Biomed) Valoare limită pentru endomisiu IgA Endomisiu IgA negativ cu zonă gri pozitivă 25 U/ml> 25 - 4U/ml (Eurospital) valoarea limită specificată pentru httg IgA transglutaminază IgA negativ pozitiv 100U/ml au fost diluate 1: 1001 cu tampon de probă (două etape de diluare) și măsurate din nou. Rezultat și valoare limită Tabelul 10: Valoarea limită pentru gliadină IgA/IgG și transglutaminază dată de producător (Pharmacia) Gliadin IgA Gliadin IgG Transglutaminază Negativ 17 U/ml> 17 U/ml> 8 U/ml Cele date aici pentru evaluarea măsurătorilor ttg Valorile normale au fost determinate pe baza unui studiu clinic realizat de A. Bürgin-Wolff și F. Hadziselimovic, Laboratorul pentru diagnosticarea bolilor celiace, CH-4410 Liestal, Elveția.