Fluctuații de timp de păstrare - Partea 1 SHIMADZU DEUTSCHLAND

9 - timpul de retenție partea 1

10 - timpul de retenție partea 2

11 - Viața coloanei - Partea 1

12 - Viața coloanei - Partea 2

Cele mai frecvente tipuri de detecție în HPLC sunt absorbția UV, fluorescența și detectarea indicelui de refracție. Aceste tipuri de detecție nu sunt specifice substanței și, în majoritatea cazurilor, analiții sunt alocați prin timpul de retenție. Dacă timpul de păstrare fluctuează, pot apărea rezultate incorecte. Prin urmare, reproductibilitatea timpului de reținere este de o mare importanță.

În cele ce urmează, precum și în săptămâna viitoare, sunt prezentate diferitele influențe.

1. Influența temperaturii

Ca și în cazul multor probleme în HPLC, temperatura are și o influență asupra timpului de reținere. Cu cât temperatura este mai mare, cu atât vâscozitatea fazei mobile este mai mică. Prin urmare, contrapresiunea din sistem scade și odată cu creșterea temperaturii. De regulă, o modificare a temperaturii de 1 ° C duce la o schimbare de 1 până la 2% a timpului de reținere. Prin urmare, schimbarea timpului datorată fluctuațiilor de temperatură este mai mare pentru analiții cu eluare târzie. În următoarele patru parabeni au fost măsurați la temperaturi diferite.

Dacă comparați măsurarea la 20 și 50 ° C, timpul total de funcționare este aproape înjumătățit. Această influență poate fi, desigur, utilizată și pentru optimizarea sau scurtarea metodei, cu condiția să rămână în specificațiile coloanei. Cu toate acestea, la temperaturi foarte ridicate, se poate aștepta ca majoritatea coloanelor să aibă o durată de viață mai scurtă.

Cu toate acestea, dacă temperatura trebuie utilizată pentru optimizare, trebuie remarcat faptul că nu toți analiții reacționează în același mod la o schimbare de temperatură. După cum se arată în exemplul din dreapta, se pot comporta foarte diferit. În timp ce analiții sunt separați la 20 ° C, acidul sorbic și acidul benzoic co-eluează la 30 ° C. Dacă temperatura crește în continuare, secvența de eluare poate fi chiar inversată. Dacă acest lucru nu este observat, aici pot apărea și rezultate incorecte.

În cel mai bun caz, utilizați un cuptor pe coloană pentru a menține temperatura coloanei cât mai constantă posibil.

1: Acid sorbic, 2: Acid benzoic, 3: Metilparaben

2. Modificarea debitului

Fiecare pompă are un anumit număr de piese consumabile, care trebuie înlocuite la intervale regulate. La fel și de ex. majoritatea garniturilor de piston sunt specificate pentru a transporta un anumit volum. Dacă uzura a progresat prea mult, acestea se pot scurge și astfel afectează debitul. Dacă timpii de reținere fluctuează, o pompă defectă poate fi, de asemenea, problema.

Cel mai simplu mod de a verifica pompele este de a le măsura. Pentru a face acest lucru, luați un cilindru de măsurare, conectați un capilar contrapresiune direct la pompă și setați un debit definit. Acum comparați timpul în care un anumit volum este pompat cu debitul stabilit.

Verificați consumabilele HPLC la intervale regulate. Păstrați și piesele de schimb pregătite pentru a înlocui rapid piesele defecte.

Din păcate, toate măsurile care duc la stabilizarea condițiilor cromatografice sunt de puțin ajutor dacă lucrați cu metode foarte robuste. În astfel de condiții, chiar și mici modificări de ex. temperatura sau eluantul au o influență majoră asupra timpului de reținere.

Ca urmare, eșantioanele trebuie deseori repetate sau evaluarea refăcută manual. Aceasta este o mare problemă, mai ales într-un mediu reglementat.

Este mai bine să investiți mai mult timp în dezvoltarea unor metode solide. Retrospectiv, veți avea mai puțin efort și mai mult timp în rutină, iar timpul investit înainte va fi amortizat foarte repede.

Lucruri de luat în considerare în fiecare zi:

General:

• Efectuați periodic teste de aptitudine
• Verificați consumabilele la intervale regulate
• Documentarea timpilor de păstrare, dizolvarea etc. a soluțiilor de referință

Sistem:

• Folosiți un cuptor pe coloană pentru controlul temperaturii
• Păstrați un jurnal de coloană
• Întreținerea documentelor

Săptămâna următoare, cu influențele compoziției eluente, a coloanei și a timpului de echilibrare, are și subiect fluctuațiile timpului de reținere.

---