Imunologie - Bioxa - 11 laboratoare de biologie medicală - Reims, Epernay, Tinqueux, Sézanne

Imunologie

Imunologie

Anticorpi anti-nucleari

Anticorpii anti-nucleari (ANA) sunt autoanticorpi direcționați împotriva factorilor determinanți antigenici ai nucleului celulelor corpului, sunt depistați în timpul bolilor nespecifice autoimune ale organelor numite conectivită, dintre care cel mai cunoscut este Lupus Eritematos Diseminat (LED).

imunologie

Acestea sunt căutate prin imunofluorescență indirectă (IFI) pe culturi de celule Hep-2 umane, pe care putem distinge multe aspecte ale fluorescenței legate de tipul de anticorp detectat. Finetea imaginilor obținute în fluorescență a făcut astfel posibilă descrierea multor anticorpi diferiți legați de diferite tipuri de patologii (vezi Anticoagulanți circulanți).

Detectarea ANA de către IFI

Principiu: Serul pacientului este depus pe substrat (celulele Hep-2 cel mai des) și incubat într-o cameră umedă timp de 30 de minute, în acest timp, anticorpii prezenți în ser se vor lega de țintele lor antigenice, iar prezența lor va fi dezvăluită. prin adăugarea unui anticorp anti-imunoglobulină uman marcat cu fluoresceină. Citirea va determina cei 2 parametri esențiali ai acestei tehnici: aspectul fluorescenței și titrul anticorpului.

Interpretare: Apariția fluorescenței poate fi omogenă, pătată, nucleolară, citoplasmatică sau membranară în funcție de antigenii recunoscuți, toate amestecurile dintre aceste diferite tipuri fiind posibile.

Titrul anticorpului este exprimat odată cu ultima diluție a serului dând fluorescență vizibilă, la adulți nivelul minim semnificativ este 1/80 (1/40 la copii), nivelurile sunt măsurate până la diluarea 1/640, ceea ce corespunde unei rate foarte mari, diluția ar putea fi continuată pentru a distinge două tipuri de fluorescență care s-ar suprapune pe același suport.

Identificarea ANA

În funcție de aspectul fluorescenței observate, care va fi mai mult sau mai puțin sugestivă pentru un anumit tip de anticorp, pot fi utilizate diferite tehnici pentru identificarea ANA.

1 Anticorpi anti-ADN, nativi și/sau denaturați:
Majoritatea anticorpilor anti-ADN recunosc ambele tipuri de molecule, ADN-ul nativ fiind ADN bicatenar și denaturat monocatenar, căutarea numai a anticorpilor anti-ADN prezintă un interes redus (multe cazuri fără corelație clinică). În prezent există 4 tehnici disponibile pentru căutarea acestor anticorpi.

  • Testul lui Farr: După incubarea serului cu ADN radiomarcat, complexele imune sunt precipitate, iar radioactivitatea prezentă în precipitat este proporțională cu nivelul anticorpilor anti ADN din probă. Acest test are marele avantaj de a fi cantitativ (rezultând UI/ml), dar implementarea sa tehnică este dificilă.
  • IFI pe Crithidia luciliae: Este un protozoar flagelat care conține un kinetoplast foarte bogat în ADN nativ circular, imaginea fluorescentă permite citirea ușoară, kinetoplastul, situat nu departe de corpul bazal al flagelului, fiind ușor distins de miez. Rezultatul obținut este calitativ.
  • Testele ELISA: Fragmentele de ADN nativ fixate la fundul godeurilor plăcilor de microtitrare leagă anticorpii serului pacientului, care vor fi apoi dezvăluite de un anticorp IgG anti-uman marcat cu peroxidază, de exemplu. rezultatele sunt cantitative și exprimate în diferite unități în funcție de tehnica utilizată (cel mai adesea UI/ml).
    Immunodot: Aceasta este o tehnică ELISA efectuată pe o bandă de nitroceluloză de care a fost atașat ADN-ul nativ. Citirea oferă un rezultat calitativ, care uneori este dificil de interpretat pentru niveluri scăzute de anticorpi.

2 Anticorpi anti-histonici:
Este un grup pestriț de anticorpi care reacționează cu diferite histone sau nucleozomi, sunt cel mai adesea căutați de ELISA, se găsesc în LES și în majoritatea LES induse de medicamente, interesul lor clinic rămâne pentru moment.

3 Anticorpi antigeni nucleari solubili (ENA):
Acestea sunt direcționate împotriva constituenților extractibili ai nucleului și sunt responsabili pentru diferite tipuri de fluorescență pătată. Au nume legate de primul pacient descris (Sm), sau de patologia asociată (SS pentru sindromul Sjögren), sau greutatea lor moleculară (gp100).

Clasificare:

Anticorpi anti-RNP: Se găsesc în LES și conectivită mixtă.

Anticorpi anti-Sm: Se găsesc în 70% din lupus și practic doar în această patologie.

Anticorpi anti-SS-A: Se găsesc în unele LES, dar mai ales în sindromul Gougerot-Sjögren. Acestea sunt, de asemenea, asociate cu un risc crescut de bloc atrioventricular la nou-născuții ale căror mame sunt purtătoare ale acestui tip de anticorp.