Microcosmos Agar-Block pentru descompunerea țesuturilor vegetale controlate prin protocolul de ciuperci aerobe
rezumat
Acest videoclip prezintă o abordare pentru a studia mediul controlat al degradării țesuturilor plantelor lignocelulozice de către ciuperci aerobe. Abilitatea de a controla sursele de nutrienți și umiditate este unul dintre principalele beneficii ale microcosmosului, dar abordarea oferă adesea rezultate mixte. Abordăm capcanele critice pentru un randament reproductibil, o variabilitate redusă a rezultatelor.
Abstract
Aici folosim ciuperca de degradare a lemnului putrezit maro Serpula lacrymans pentru a degrada lemnul în agar bloc microcosmos, folosind cutii Petri cu adâncime mică de agar calciu. Testăm rolul factorilor exogeni asupra descompunerii gipsului într-o serie de timp, pentru a demonstra utilitatea și variabilitatea așteptată. Blocurile cu margine unică RIP (tăiate longitudinal) sunt ambalate, cântărite, autoclavizate și introduse aseptic în plasă de plastic superioară. Inoculările fungice sunt pe fiecare față a blocului, cu gips exogen adăugat la interfețe. Culturile sunt aseptice până la recolta finală distructivă. Aceste microcosmosuri sunt concepute pentru a evita contactul cu blocurile de agar sau pereții din placa Petri. Condensarea este minimizată atunci când placa se revarsă și în timpul incubației. În cele din urmă, distanța dintre inocul/ipsos/lemn este menținută la minimum, dar fără a permite contactul. Aceste aspecte mai puțin tehnice ale proiectării blocurilor de agar sunt, de asemenea, cele mai frecvente cauze de eșec și principala sursă de variabilitate între studii. Publicarea video este, prin urmare, utilă în acest caz și prezentăm variabilitate redusă, rezultate de înaltă calitate.
Protocol
Acest protocol se aplică atât substraturilor lemnoase, cât și celor ne-lemnoase, așa cum este indicat, precum și materialelor uscate la cuptor sau la aer. Citiți protocolul mai întâi, însă, înainte de configurare. Există mai multe puncte ridicate care se pot aplica studiului dvs., iar aceste puncte (subliniate) necesită planificare. Rețineți, de asemenea, că există două metode publicate de blocare agar care sunt uneori folosite, una din standardul britanic 838 și alta în urma unui document al Grupului internațional de cercetare a protecției lemnului (IRG-WP) prezentat de bravură (1978). Metoda noastră seamănă cu 838, cu adaptări în primul rând în proiectarea microcosmosului și controlul agarului, dar din nou, ambele abordări sunt adesea evitate din cauza problemelor istorice de control al umidității în blocurile de lemn, provocând anoxia și variabilitatea. O revizuire bună a acestor metode de testare, care include discuții despre proiectele de blocuri de agar, inclusiv standardul 838, poate fi găsită în Nicholas (1973).
1) Pregătirea microcosmosurilor
Microcosmosele pentru aceste teste sunt cu 1 cm mai mari (mai adânci) decât vasele Petri tipice, ceea ce crește spațiul capului deasupra blocurilor de lemn. Acestea sunt umplute cu o cantitate modestă și exactă de agar, pentru a controla cantitățile absolute de nutrienți, în plus față de concentrația lor, și pentru a menține blocurile de lemn la distanță (> 3 mm) de capac. Agarul utilizat în acest caz al testării gipsului este un tip de Agar slab de calciu; cu toate acestea, prezentăm rezultate reprezentative folosind mediu Blakeslee, media ATCC recomandată pentru menținerea testului de izolare a serpulei lacrymans (Wulfen: Fries) tulpina Schroeter APEM 65 (ATCC 32750).
Acest design menține țesutul vegetal departe de contactul cu agar și în siguranță de capacul plat și pereți. Umectarea variabilă a substraturilor lignocelulozice este principala sursă de variabilitate în testele de bloc agar. Umezirea pentru a crește conținutul de umiditate creează anoxie și suprimă sau chiar oprește biodegradarea aerobă. De asemenea, creează o problemă pentru oricine studiază mecanismele oxidative ale ciupercilor de putregai maro și alb responsabile de degradarea lemnului. Condensarea pe capacele plăcii este o problemă dacă picăturile de apă se formează libere și udă substratul. La fel, lemnul și alte țesături vor „șterge” apa rapid din agar la contact, ducând la conținuturi de apă peste 80% (greutate uscată. Bază) și stopând degradarea aerobă. Țesuturile trebuie ținute departe de aceste surse de apă, permițând ciupercii filamentoase să găsească, să conecteze și să controleze umiditatea din substrat.
(Notă. Este înțelept atunci când utilizați medii alternative, în special cu săruri de bază adăugate cu agar minim nutritiv, să verificați mai întâi că ciuperca de testare va crește pe ea, deoarece forțe ionice ridicate pot inhiba creșterea sau chiar vă pot ucide testul de izolare) Utilizați o pipetă portabilă de ajutor și 10 ml pipete sterile de polistiren pentru a transfera aseptic agar într-un dulap de siguranță biologică, flacoanele odată reci. Lăsați media să se răcească să se atingă aici este important pentru a minimiza condensul. De asemenea, stivați plăcile la înălțime pe măsură ce sunt turnate, pentru a minimiza apa liberă pe capace. În timp ce condensarea este o problemă în cultivarea normală, aceasta reprezintă o problemă majoră în cazul în care DRO formează plăci și udă lemnul. Conținutul de umiditate (MC) de peste 80% (greutate uscată) va crea anoxie în țesuturi, va limita degradarea de către ciuperci aerobe și va crește variabilitatea. Calculați MC după cum urmează:
MC * = [(greutate proaspătă x greutate uscată)/greutate uscată] x 100
2) Pregătirea substraturilor „Block”