Ou de pui embrionat - Biologie

Cât de fierbinte este prea fierbinte pentru viața adâncă sub fundul oceanului?

Antibiotice din bacterii

Migrația celulară: funcția nou descoperită a unei proteine ​​cunoscute

Busolă moleculară pentru alinierea celulelor

Ceea ce face ca frunzele să îmbătrânească toamna

Democrația bibilicilor vultur

Mediul lui Ekembo: Oamenii au trăit și în peisaje deschise

| Genetica | Agricultură, silvicultură și creșterea animalelor

Soiul de grâu a fost creat prin traversarea ierburilor sălbatice

Cât de fierbinte este prea fierbinte pentru viața adâncă sub fundul oceanului?

Ou de pui embrionat

agenți patogeni

Tehnica oului de pui embrionat

Doar ouăle de pui provenite din populații de pui controlate infecțios sunt utilizate pentru a multiplica virusurile, deoarece embrionul nu trebuie să fie pre-infectat cu agenți patogeni naturali care cauzează boli de pui. Aceste ouă se mai numesc specificat fără patogeni (Ouă SPF). Pentru a obține o dimensiune adecvată a embrionului, ouăle de pui fertilizate sunt incubate în incubatoare speciale timp de 5 până la 14 zile la 38 ° C și o umiditate relativă de 60%, în funcție de tehnica de infecție selectată ulterior. Aceste incubatoare au, de asemenea, un dispozitiv de rotire care mișcă ouăle în mod regulat. Cu un ecran luminescent special, dezvoltarea embrionului poate fi observată după îndepărtarea ouălor („pură”), sortarea ouălor moarte sau ne-fertilizate.

Inocularea organelor apendice

De obicei nu este embrionul în sine, ci organele sale anexe care sunt inoculate. În funcție de specia de virus sau de întrebare (reproducere sau detectarea virusului), acestea sunt sacul gălbenuș, amnionul, alantoida sau membrana alantoică corionică (CAM). Deoarece acestea prezintă o dimensiune optimă pentru inoculare și susceptibilitate la viruși în momente diferite în timpul dezvoltării embrionare, lungimea timpului de incubație pentru ouăle utilizate este, de asemenea, diferită. Cel mai bun moment pentru infecțiile sacului gălbenușului este de 5 până la 7 zile după fertilizare, pentru amnion și alantoid 10 zile, pentru CAM 11 până la 12 zile. Dacă inocularea are loc prea devreme, organul apendicelui nu este suficient de mare, dacă are loc prea târziu, influențele din ce în ce mai inhibitoare ale sistemului imunitar (inclusiv formarea imunoglobulinei Y) sau o susceptibilitate scăzută a organelor pot preveni o infecție cu succes.

Inocularea se efectuează în condiții sterile pentru a evita contaminarea bacteriană. După dezinfectare, coaja de ou se deschide cu un mic pumn. Când CAM-ul este inoculat, acesta are loc pe latura oului pe care se sprijină embrionul în interior; în toate celelalte organe anexe, se deschide stâlpul de ou contondent. Aproximativ 0,1 până la 0,2 ml de lichid care conține virus (inocul) este injectat în structura corespunzătoare folosind o canulă. Apoi castronul este închis cu un adeziv sau ceară. După o zi de incubare suplimentară, ouăle sunt verificate cu un dispozitiv ușor și embrionii morți sunt sortați ca daune de inoculare. După încă 1 până la 6 zile, virusurile reproduse pot fi obținute din lichidul alantoic sau amniotic (albuș de ou) sau din membrana CAM și a sacului gălbenuș. Înainte de aceasta, oul este depozitat peste noapte la 4 ° C, astfel încât embrionul să moară și vasele de sânge să se contracte. Urmează, de obicei, alte etape de purificare, cum ar fi filtrarea sau ultracentrifugarea, pentru a obține preparate virale cât mai pure posibil.

Evaluarea dezvoltării embrionilor

Ouăle inoculate sunt radiografiate în mod regulat, de obicei zilnic, și se evaluează starea de dezvoltare a embrionului. Dacă sunt excluse contaminarea bacteriană și deteriorarea inoculării, moartea embrionului poate indica replicarea virusului, acest lucru poate fi observat, de exemplu, după inocularea sacului gălbenușului cu virusuri herpes simplex. Alte semne vizibile macroscopic de replicare a virusului sunt marcaje vasculare crescute la embrion, semne de inflamație, sângerări petechiale sau malformații. Când sunt vaccinați cu virusurile variolei, virusurile herpes simplex și virusul sarcomului Rous, apar modificări întunecate și petice pe CAM, așa-numitul „Pocks”. Acestea sunt atât de caracteristice încât pot fi utilizate pentru a pune un diagnostic atunci când este detectat un virus. În majoritatea cazurilor, urmează diferite examinări suplimentare pentru identificarea agentului patogen, de exemplu un examen microscopic electronic, un test de hemaglutinare sau detectarea directă a componentelor virusului (antigeni și acid nucleic) pentru o tipare precisă.

Importanța în diagnosticarea virusului

Importanța oului de găină embrionat pentru izolarea virusului și diagnosticarea virusului este limitată, în cazul virușilor umani este acum limitată la izolarea și tiparea virusurilor gripale. Când se izolează agenți patogeni noi, necunoscuți, pe lângă metodele moleculare, cultura celulară și microscopia electronică, sunt utilizate și ouă de găină embrionate. În medicina veterinară, un număr de agenți patogeni sunt crescuți în cultura ouălor, inclusiv reprezentanți ai virusurilor variolei, ortomixovirusurilor, virusurilor herpetice, togavirusurilor și diferiților virusuri aviare. Tabelul următor oferă o prezentare generală a celor mai importanți agenți patogeni și a comportamentului acestora în ouăle de găină embrionate. Unele viruși pot fi propagate cu succes și cu un randament acceptabil în ouăle de găină numai dacă tipul sălbatic a fost adaptat oului de găină prin mai multe pasaje (pasaje oarbe).

Producerea de vaccin în oul de găină embrionat

Marele avantaj al replicării virusului în ouăle de găină embrionate este randamentul ridicat al virusului. Aceasta a fost utilizată la producerea diferitelor vaccinuri încă din anii 1960, de exemplu pentru a obține suficientă materie primă pentru vaccinurile moarte (vaccinuri divizate) împotriva virusului rujeolei și a diferitelor virusuri gripale. Mai ales în cazul celor din urmă, reproducerea în culturi celulare nu a atins încă concentrații de virus suficient de mari, astfel încât oul de găină embrionat determină în continuare producția industrială de vaccinuri antigripale până în prezent. Cu toate acestea, problema acestei metode este curățarea consumatoare de timp a materialului din ouă, care lasă întotdeauna urme de proteine ​​din ouă și, prin urmare, nu poate fi administrată dacă există o alergie la proteinele de pui.