Phospho-Smad2 (Ser465467) Smad3 (Ser423425) (D27F4) Rabbit mAb

Analiza Western blot a extractelor din celule HaCaT, netratate (-) sau tratate cu hTGF-β3 # 8425 (+) în absența sau prezența inhibitorului TGFR SB 431542, utilizând Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) Rabbit mAb (superior) sau Smad2/3 (D7G7) XP ® Rabbit mAb # 8685 (inferior).

Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) Rabbit mAb 8828

smad3

Analiza Western blot a extractelor din celule HaCaT, netratate (-) sau tratate cu hTGF-β3 # 8425 (+) în absența sau prezența inhibitorului TGFR SB 431542, utilizând Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) Rabbit mAb (superior) sau Smad2/3 (D7G7) XP ® Rabbit mAb # 8685 (inferior).

  • Reprezentantul local
  • Informațiile dvs. locale de cumpărare
  • Garanția anticorpilor
  • FAQ
  • Suport tehnic
  • Certificat de analiză
  • Date suport
  • produse asemanatoare
  • Utilizarea produsului
  • Protocoale
  • fundal
  • Căi și proteine
  • Referințe și recenzii

Date suport

REACTIVITATE H M R Mk
SENSIBILITATE Endogen
MW (kDa) 52, 60
Sursă/izotip Iepure IgG

Cheia aplicației:

  • W.-de film western
  • IP-Imunoprecipitare
  • IHC-Imunohistochimie
  • Chip-Imunoprecipitarea cromatinei
  • DACĂ-Imunofluorescența
  • F.-Citometrie în flux
  • E-P-Peptide ELISA

Cheia de reactivitate încrucișată a speciilor:

  • H-Uman
  • M.-Șoarece
  • R.-sfat
  • Hm-hamster
  • Mk-Maimuţă
  • Miercuri-Nurcă
  • C.-Pui
  • Dm-D. melanogaster
  • X-Xenopus
  • Z-Zebrafish
  • B.-Bovin
  • Dg-Câine
  • Pag-Porc
  • Sc-S. cerevisiae
  • Ce-C. elegans
  • Domnul-Cal
  • Alles-Toate speciile se așteptau
Smad2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb # 8685
Smad2/3 Anticorp # 3102
Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb # 5339
Smad2/3 Anticorp # 5678
Phospho-Smad3 (Ser423/425) (C25A9) Rabbit mAb # 9520
Phospho-Smad1 (Ser463/465)/Smad5 (Ser463/465)/Smad9 (Ser465/467) (D5B10) Rabbit mAb # 13820
Phospho-Smad2 (Ser465/467) (138D4) Rabbit mAb # 3108
Smad3 (C67H9) Rabbit mAb # 9523
Phospho-Smad1/5 (Ser463/465) (41D10) Rabbit mAb # 9516
Phospho-SMAD2 (Ser465/Ser467) (E8F3R) Rabbit mAb # 18338

Informații despre utilizarea produsului

Depozitare

Livrat în 10 mM sodiu HEPES (pH 7,5), 150 mM NaCI, 100 µg/ml BSA, 50% glicerol și mai puțin de 0,02% azidă de sodiu. A se păstra la -20 ° C. Nu alicotați anticorpul.

Protocol

Protocolul Western Blotting

Pentru Western blots, incubați membrana cu anticorp primar diluat în 5% greutate/volum BSA, 1X TBS, 0,1% Tween® 20 la 4 ° C cu agitare ușoară, peste noapte.

GRAD: Vă rugăm să consultați pagina web a produsului anticorp primar pentru diluarea recomandată a anticorpilor.

A. Soluții și reactivi

De la pregătirea eșantionului până la detectare, reactivii de care aveți nevoie pentru Western Blot sunt acum într-un singur kit convenabil: # 12957 Western Blotting Application Solutions Kit

GRAD: Pregătiți soluții cu osmoză inversă deionizată (RODI) sau apă de calitate echivalentă.

B. Blotarea proteinelor

Un protocol general pentru prepararea probei.

  1. Tratați celulele adăugând medii noi care conțin regulator pentru timpul dorit.
  2. Aspirați mass-media din culturi; spălați celulele cu 1X PBS; aspirat.
  3. Lizați celulele adăugând 1X tampon de probă SDS (100 µl per godeu de placă cu 6 godeuri sau 500 µl pentru o placă cu diametru de 10 cm). Îndepărtați imediat celulele de pe placă și transferați extractul într-un tub de microcentrifugă. Păstrați pe gheață.
  4. Sonicați timp de 10-15 secunde pentru a finaliza liza celulară și ADN de forfecare (pentru a reduce vâscozitatea probei).
  5. Se încălzește o probă de 20 pl la 95-100 ° C timp de 5 minute; rece pe gheață.
  6. Microcentrifuga timp de 5 min.

Încărcați 20 µl pe gel SDS-PAGE (10 cm x 10 cm).

GRAD: Se recomandă încărcarea markerilor de greutate moleculară preconizați (# 13953, 5 µl/bandă) pentru a verifica electrotransferul și scara de proteine ​​biotinilate (# 7727, 10 µl/bandă) pentru a determina greutățile moleculare.

  • Electrotransfer la membrana de nitroceluloză (# 12369).

    • C. Blocarea membranei și incubațiile de anticorpi

    GRAD: Volumele sunt pentru membrană de 10 cm x 10 cm (100 cm 2); pentru membrane de dimensiuni diferite, reglați volumele în mod corespunzător.

    I. Blocarea membranei

    1. (Opțional) După transfer, spălați membrana de nitroceluloză cu 25 ml TBS timp de 5 minute la temperatura camerei.
    2. Se incubează membrana în 25 ml de tampon de blocare timp de 1 oră la temperatura camerei.
    3. Se spală de trei ori timp de 5 min fiecare cu 15 ml TBST.

    II. Incubația primară a anticorpilor

    1. Incubați membrana și anticorpul primar (la diluarea și diluantul adecvat, așa cum se recomandă în pagina web a produsului) în 10 ml tampon de diluare a anticorpului primar cu agitare ușoară peste noapte la 4 ° C.
    2. Se spală de trei ori timp de 5 min fiecare cu 15 ml TBST.
    3. Incubați membrana cu IgG anti-iepure, anticorp legat de HRP (# 7074 la 1: 2000) și anti-biotină, anticorp legat de HRP (# 7075 la 1: 1000–1: 3000) pentru a detecta markeri de proteine ​​biotinilate în 10 ml de tampon de blocare cu agitare ușoară timp de 1 oră la temperatura camerei.
    4. Se spală de trei ori timp de 5 min fiecare cu 15 ml TBST.
    5. Continuați cu detectarea (secțiunea D).

    D. Detectarea proteinelor

    Instrucțiunile de utilizare:

    1. Se spală HRP legat de membrană (anticorp conjugat) de trei ori timp de 5 minute în TBST.
    2. Pregătiți reactivul 1L SignalFire ™ ECL (# 6883) prin diluarea unei părți reactiv 2X A și o parte reactiv 2X B (de exemplu, pentru 10 ml, adăugați 5 ml reactiv A și 5 ml reactiv B). Amesteca bine.
    3. Incubați substratul cu membrană timp de 1 minut, îndepărtați soluția în exces (membrana rămâne umedă), înfășurați-o în plastic și expuneți-o la film cu raze X.

    * Evitați expunerea repetată la piele.

    postat în iunie 2005

    revizuit în iunie 2020

    Specificitate/Sensibilitate

    Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) Iepurele mAb recunoaște nivelurile endogene de proteină Smad2 atunci când este fosforilată la Ser465 și Ser467. Acest anticorp recunoaște, de asemenea, nivelurile endogene de proteină Smad3 atunci când fosforilează numai Ser422 sau atât la Ser423, cât și la Ser425.

    Reactivitatea speciilor:

    Om, șoarece, șobolan, maimuță

    Sursă/purificare

    Anticorpul monoclonal este produs prin imunizarea animalelor cu o peptidă sintetică corespunzătoare reziduurilor din jurul Ser465/467 de proteină Smad2 umană.

    fundal

    Membrii familiei Smad de molecule de transducție a semnalului sunt componente ale unei căi intracelulare critice care transmit semnale TGF-β de la suprafața celulei în nucleu. Au fost definite trei clase distincte de Smads: Smad-urile reglementate de receptor (R-Smads), care includ Smad1, 2, 3, 5 și 8; mediatorul comun Smad (co-Smad), Smad4; și Smad-urile antagoniste sau inhibitorii (I-Smad-urile), Smad6 și 7 (1-5). Receptorii de tip I activi se asociază cu R-Smad-uri specifice și le fosforilează pe un motiv conservat SSXS carboxi-terminal. R-Smad fosforilat se disociază de receptor și formează un complex heteromeric cu co-Smad (Smad4), permițând translocarea complexului către nucleu. Odată ajuns în nucleu, Smads poate viza o varietate de proteine ​​care leagă ADN-ul pentru a regla răspunsurile transcripționale (6-8).

    Căi și proteine

    Explorează căi + proteine ​​legate de acest produs.