Purificarea anticorpilor monoclonali SpringerLink

rezumat

Imunoglobulina din serul șoarecelui purtător de ascită care a intrat în ascita tumorii poate simula reactivitatea mAb cu un antigen împotriva căruia șoarecele a fost imunizat anterior în mod natural. În practică, acest lucru este deosebit de important atunci când mAb este prezent în lichidul ascitic în concentrație scăzută sau are doar o afinitate scăzută pentru antigenul său și, prin urmare, nu poate fi utilizat în diluții mari. O probă de ser de la șoarece, care a fost obținută înainte de injectarea celulelor hibridomului, poate fi utilizată ca martor în astfel de cazuri.

În cazul marcării directe (de exemplu cu biotină, peroxidază sau fluorocrom) a unui preparat insuficient de pur de un mAb, pot fi etichetate și proteine suplimentare (de exemplu insulină sau transferină etc.). Dacă acum anticorpul este obișnuit, de ex. Pentru a examina celulele pentru exprimarea antigenului recunoscut de anticorpul monoclonal, celulele care poartă receptori pentru o proteină contaminantă (de exemplu, receptori de transferină) pot fi, de asemenea, etichetați.

Dificultăți deosebite apar atunci când se utilizează prepararea mAb în sistemele de testare biologică. Activitatea preconizată a anticorpului poate fi modificată prin contaminarea mediatorilor imuni. Deoarece mulți dintre acești mediatori imuni nu sunt încă suficient de bine definiți, nu se poate exclude faptul că sunt încă prezenți în preparat chiar și după ce anticorpul a fost purificat cu atenție. În astfel de cazuri, un anticorp din aceeași subclasă de imunoglobulină, care nu reacționează cu antigenul în cauză, dar provine din aceeași fuziune și a fost preparat și purificat în aceleași condiții, ar putea servi ca anticorp de control.