Semnele biochimice ale funcției cobalaminei afectate influențează cele hematologice

• subiecte
• abstract
• Fundal:
• Metode:
• Rezultate:
• Concluzie:
• Principal
• Rezultate
• Demografie și nutriție
• Statutul de cobalamină și folat pentru sugari
• Parametrii hematologici la sugari
• discuţie
• Concluzie
• Metode
• Studiați populația și proiectarea
• Recoltarea sângelui și analiza biochimică
• analize statistice
• Declarația de sprijin financiar
• Dezvăluire

subiecte

abstract

Fundal:

În timp ce deficitul de fier este cea mai frecventă cauză a anemiei la sugari, deficitul de cobalamină se caracterizează în primul rând prin întârzieri în dezvoltare și anemia macrocitară tipică se limitează la deficiența de cobalamină severă și de lungă durată în această grupă de vârstă. Parametrii hematologici au fost evaluați la sugarii în vârstă de 4 luni, cu dovezi biochimice ale funcției cobalaminei afectate, care au participat la un studiu de intervenție randomizat, controlat cu cobalamină la 6 săptămâni.

Metode:

O sută nouăzeci și șapte de sugari au fost selectați aleator pentru a primi fie 400 ul injecție intramusculară. g cobalamină sau nicio intervenție primită la 6 săptămâni. Parametrii hematologici și starea de cobalamină și folat au fost determinați la includere și la 4 luni.

Rezultate:

Suplimentarea cu cobalamină a îmbunătățit toți markerii funcției de cobalamină afectată, dar nu a avut niciun efect asupra numărului de celule hematologice la 4 luni (P> 0,18). Au fost observate semne ale eritropoiezei cu restricție de fier la 6 săptămâni și 4 luni. Cei mai puternici predictori ai unei stări scăzute de fier au fost bărbații la 4 luni și un procent ridicat de creștere în greutate de la naștere.

Concluzie:

La sugarii cu semne biochimice ale funcției cobalaminei afectate, suplimentarea nu îmbunătățește numărul de celule hematologice. Variațiile parametrilor celulelor roșii din sânge par a fi legate în primul rând de starea fierului în această grupă de vârstă.

Copilăria este o perioadă caracterizată printr-o creștere rapidă, cu o nevoie crescută de mai mulți micronutrienți și un risc ulterior de deficit de nutrienți (1). Atât deficiențele de fier, cât și cele de cobalamină se găsesc la sugarii alăptați predominant (1, 2). În timp ce deficitul de fier este cea mai frecventă cauză de anemie la sugari (3), deficitul de cobalamină se caracterizează în principal printr-o întârziere a dezvoltării în această grupă de vârstă (2, 4). S-a raportat că sugarii cu deficiență marginală de cobalamină au valori hematologice normale (5, 6), iar pancitopenia și anemia macrocitară sunt observate în principal în deficiența de cobalamină severă și prelungită (2).

Evaluarea nutriției la sugari poate fi dificilă din cauza modificărilor fiziologice extinse din primele câteva luni de viață, ceea ce face dificilă interpretarea parametrilor comuni de laborator (2, 7). Cobalamina serică scade semnificativ în primele câteva săptămâni și rămâne scăzută în primele 6 luni, în timp ce folatul seric crește și rămâne ridicat în primul an de viață (8). Aceste modificări sunt însoțite de o creștere a markerilor metabolici homocisteină (tHcy) și acid metilmalonic (8). Suplimentarea cu cobalamină modifică toți markerii afectării stării de cobalamină către un profil observat la copiii mai mari și adulți cu bogăție în cobalamină, sugerând că nivelurile ridicate de THC și acid metilmalonic raportate într-o proporție mare dintre sugarii alăptați în principal nu reflectă metabolismul imatur dar prea puține reacții cobalaminice dependente de cobalamină sunt complet menținute (9).

Viteza sintezei hemoglobinei și a producției de eritrocite scade dramatic în primele zile după naștere și atinge un minim în a doua săptămână de viață. Datorită eritropoiezei suprimate și a duratei de viață redusă a eritrocitelor fetale (60-70 zile), nivelul hemoglobinei (Hb) și numărul de eritrocite ating valorile cele mai mici după naștere

La 2 luni după naștere (10, 11). Dimensiunea eritrocitelor, determinată de volumul celular mediu (MCV), scade și este cea mai mică la 6 luni, după care crește treptat (10). În timp ce parametrii normali ai eritrocitelor, cum ar fi nivelurile de Hb și MCV, reflectă valorile medii ale unei populații de eritrocite cu o durată medie de viață de 120 de zile, conținutul de hemoglobină reticulocit (CHr) oferă o evaluare în timp real a eritropoiezei în ultimii 24 până la 48 de ani (12). Acest beneficiu face CHr util în perioadele de schimbări fiziologice rapide și s-a sugerat că CHr este cel mai bun predictor al deficitului de fier la sugari și este superior parametrilor tradiționali ai fierului, cum ar fi feritina serică și saturația transferinei (7).

Am efectuat anterior un studiu randomizat de intervenție controlată a cobalaminei cu sugari alăptați în principal cu vârsta de 6 săptămâni, cu dovezi biochimice ale funcției cobalaminei afectate (9). În acest articol raportăm efectul suplimentării cu cobalamină asupra parametrilor hematologici la sugari la vârsta de 4 luni. Scopul acestui studiu a fost de a investiga dacă profilul metabolic, care indică afectarea funcției cobalaminei, este legat de producția liniei celulare hematologice în primele luni de viață.

Rezultate

Demografie și nutriție

Grupul de studiu a cuprins 107 sugari sănătoși cu vârsta de 6 săptămâni, 56 de băieți (52%) care s-au născut la momentul nașterii (vârsta gestațională medie 39, 9 (SD 1, 3) săptămâni) și au avut o greutate adecvată vârstei (vârsta gestațională medie 3, 578). SD 506) g). Nu au existat diferențe semnificative între grupul de cobalamină și grupul de control pe baza demografiei infantile și materne la includere și urmărire (P> 0,05), iar datele pentru grupul general sunt în Tabelul 1 listat . Au fost utilizate două tipuri diferite de formulă, ambele îmbogățite cu fier (0,7-0,8 mg la 100 ml de formulă preparată) și cobalamină (0,13-0,2 μg la 100 ml de formulă preparată). Au fost folosite diferite tipuri de terci, toate fiind fortificate cu fier (4, 8-11, 1 mg la 100 mg pulbere). Niciun copil nu a primit supliment de fier.

Procentul mediu de creștere în greutate de la naștere a fost de 39% (SD 14%) la 6 săptămâni și 95% (SD 26%) la 4 luni. Corelația Spearman a corelat creșterea procentuală în greutate la 6 săptămâni (r = –0, 44, P 0, 06).

Vârsta medie a mamei a fost de 31,5 (SD 4,8) ani, iar 63 din cele 104 mame au fost multiple, cu un număr mediu de 1,4 (interval: 1-4) copii mai devreme. 38 din 104 mame au raportat că au luat zilnic suplimente de fier pentru perioade mai scurte sau mai lungi în timpul sarcinii. Două dintre mame erau vegetariene, iar celelalte au raportat o dietă omnivoră, deși nouă mame au spus că rareori sau niciodată nu au mâncat carne (n = 6) sau pește (n = 3).

Statutul de cobalamină și folat pentru sugari

A fost publicată o descriere detaliată a stării cobalaminei și a acidului folic (9). Nivelul seric mediu de cobalamină după 6 săptămâni a fost de 170 (134-255) pmol/l și tHcy plasmatică medie a fost de 7,59 (6, 21-9, 28) μmol/l; Nu s-au observat diferențe semnificative în nivelurile de vitamine și metaboliți între cobalamină și grupurile de control. După 4 luni, grupul cu cobalamină a avut un nivel seric mediu de cobalamină cu 75% mai mare decât grupul martor, iar nivelul lor mediu de tHcy a fost redus cu 39%, dar a rămas neschimbat la controale, sugerând un răspuns metabolic la cobalamină Suplimentarea indică.

Parametrii hematologici la sugari

Relația doză-efect între procentul de creștere în greutate de la naștere până la 4 luni cu ( A ) conținutul de hemoglobină reticulocitară (CHr) și ( ) volumul mediu al celulei (MCV) la 4 luni prin modele aditive generalizate. Curbele doză-răspuns sunt prezentate ca linii solide cu intervale de încredere de 95% ca linii punctate.

• Descărcați diapozitivul PowerPoint

După 6 săptămâni, reticulocitoza a fost inversă cu nivelurile de Hb (r = -0,62, P0,06) au fost observate).

Relația doză-efect între ( A ) Nivelul de hemoglobină (Hb), ( ) volumul mediu al celulei (MCV) și ( c ) Conținutul de hemoglobină reticulocitară (CHr) pentru un număr de reticulocite de 6 săptămâni conform modelelor aditive generalizate. Curbele doză-răspuns sunt prezentate ca linii solide cu intervale de încredere de 95% ca linii punctate.

• Descărcați diapozitivul PowerPoint

discuţie

La sugarii preponderent alăptați cu un profil biochimic care indică afectarea funcției cobalaminei, suplimentarea cu cobalamină a avut o influență puternică asupra markerilor metabolici ai stării cobalaminei după 6 săptămâni (9), dar nicio influență asupra parametrilor hematologici după 4 luni. Un procent ridicat de creștere în greutate postpartum și sexul masculin au fost principalii factori determinanți ai parametrilor hematologici și au fost asociați cu o stare inferioară a fierului. Reticulocitoza a fost asociată cu MCV scăzut și CHr atât la 6 săptămâni cât și la 4 luni, indicând existența eritropoiezei cu restricție de fier în primele câteva luni de viață la sugarii alăptați în principal.

Limitările formale ale proiectului studiului au inclus lipsa orbirii investigatorilor și mamelor la injecția cu cobalamină și lipsa unei injecții placebo în grupul de control. Cu toate acestea, nu considerăm acești factori importanți pentru rezultatul hematologic la sugari la 4 luni.

Au fost utilizate teste microbiologice pentru a determina atât folatul seric, cât și cobalamina. În ultimii ani, testele de luminescență de legare competitivă au devenit din ce în ce mai populare, dar testul microbiologic este încă considerat standardul de aur pentru folatul seric (13). În timp ce testul microbiologic determină cobalamina biologic activă, testele de luminescență de legare competitivă includ, de asemenea, analogi de cobalamină inactivi din punct de vedere funcțional. Studii recente sugerează că testele de luminiscență de legare competitivă pot prezenta disfuncții pe scară largă, mai ales atunci când sunt raportate valori fals-normale pentru deficitul de cobalamină (14).

La acești sugari tineri, numărul de reticulocite a fost invers corelat cu nivelurile de Hb și au fost asociate cu indicatori scăzuți MCV și CHr ai eritropoiezei cu restricție de fier (26). Spre deosebire de adulți, la care nivelurile scăzute de Hb datorate deficitului de fier sunt de obicei asociate cu un număr normal sau scăzut de globule roșii (27), s-au observat un număr mare de globule roșii la sugarii cu vârsta cuprinsă între 6 și 48 de luni cu anemie feriprivă (28). Reticulocitoza observată la acest grup de vârstă a fost ușoară vs. anemie severă, care se datorează deficitului de fier sever asociat cu diseritropoieză, care poate reduce numărul de celule roșii din sânge care au supraviețuit (28).

Concluzie

La sugarii cu dovezi biochimice ale funcției de cobalamină afectate, suplimentarea cu cobalamină a avut un efect marcat asupra markerilor metabolici intracelulari ai stării de cobalamină după 6 săptămâni, dar nu a avut niciun efect asupra parametrilor hematologici după 4 luni. La acești sugari alăptați în principal, creșterea în greutate procentuală și sexul masculin au fost principalii factori determinanți ai parametrilor hematologici și au fost asociați cu starea de fier scăzută la 4 luni. Sunt necesare studii suplimentare asupra stării micronutrienților la sugarii tineri, în special alăptați.

Metode

Studiați populația și proiectarea

Între decembrie 2004 și aprilie 2006, 107 sugari sănătoși de 6 săptămâni, inclusiv trei perechi de gemeni, și cele 104 mame ale acestora au fost recrutați de un serviciu de sănătate local din Bergen, Norvegia, și au fost înscriși într-un studiu de intervenție cu cobalamină. A fost publicată o descriere detaliată a metodelor și rezultatelor studiului (9). Datele hematologice au fost disponibile pentru 107 sugari la 6 săptămâni și 102 sugari la 4 luni, iar acești copii au fost incluși în această analiză.

După 6 săptămâni și 4 luni a fost completat un chestionar privind nutriția maternă și a sugarului, suplimentarea vitaminelor, parametrii de creștere, paritatea și consumul de tutun matern. Deoarece toate tipurile diferite de formulă și terci folosite conțineau fier, formula pentru sugari a fost definită ca fiind exclusiv alăptată la sân versus nu exclusiv alăptată, care a inclus alăptarea combinată și hrănirea cu formulă, hrănirea cu formulă singură și ambele combinate cu alimente solide.

Sugarii au fost randomizați în bloc la o injecție intramusculară de 400 pl. g Hidroxicobalamină (Vitamina B12 Depot; Nycomed Pharma, Asker, Norvegia) (n = 54, grup cobalamină) sau atribuită fără tratament (n = 53, grup control). Personalul de laborator responsabil cu extragerea și analiza sângelui nu a avut în vedere atribuirea grupului.

Aprobarea etică a protocolului a fost dată de comitetul regional pentru etica cercetării medicale, iar mamele au dat consimțământul informat în cunoștință de cauză. Acest studiu este înregistrat la ClinicalTrials.gov sub numărul NCT00479479.

Recoltarea sângelui și analiza biochimică

Probele de sânge au fost obținute la 6 săptămâni și 4 luni prin venipunctură antecubitală și colectate în tuburi EDTA vacutainer (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ). Parametrii hematologici (Hb, MCV, eritrocite, lățimea distribuției celulelor roșii din sânge, CHr, leucocite și trombocite) au fost analizați în decurs de 4 ore cu un analizor hematologic automat (ADVIA 120; Bayer Diagnostics, Tarrytown, NY). Indicii reticulocitelor (reticulocite și CHr) au fost disponibili pentru o subpopulație a grupului de studiu (n = 62 din 107 în 6 săptămâni, n = 72 din 102 în 4 luni și n = 58 din 102 date asociate în 6 săptămâni și 4 luni). .

Probele de sânge utilizate pentru producerea plasmei EDTA au fost plasate în apă cu gheață și plasma a fost separată în decurs de 4 ore. Nivelurile plasmatice de tHcy și acid metilmalonic au fost investigate folosind o metodă de cromatografie în fază gazoasă-spectrometrie de masă bazată pe derivatizarea cloroformiatului de metil (29). Serul a fost obținut prin colectarea sângelui în tuburi vacutainer fără aditiv (Becton Dickinson). Cobalamina serică a fost determinată cu un test microbiologic Lactobacillus leichmannii (30) și folatul seric cu un test microbiologic Lactobacillus casei (31).

analize statistice

Rezultatele sunt prezentate ca interval median și intercuartil, precum și media și SD. Medianele au fost comparate cu testul Wilcoxon Signed Rank și testul Mann-Whitney U și valorile medii cu testul Student T. Diferențele în variabilele categorice au fost testate cu testul testului 2.

Corelația Spearman a fost utilizată pentru a evalua relația dintre procentul de creștere în greutate și greutatea la naștere și relația dintre parametrii hematologici la 6 săptămâni și 4 luni. Au fost utilizate mai multe modele de regresie liniară pentru a evalua relația parametrilor hematologici ai copilului (Hb, MCV și CHr) la 4 luni cu intervenție cu cobalamină, sex, creștere în greutate procentuală de la naștere la 4 luni, nutriție pentru sugari și utilizarea maternă a suplimentelor de fier de la 6 săptămâni la 4 Luni

Relațiile doză-răspuns ale nivelurilor de Hb, MCV și CHr la un număr de reticulocite de 6 săptămâni și creșterea procentuală în greutate a CHr și MCV la 4 luni au fost reprezentate grafic prin modele aditive generalizate.

Modelele aditive generalizate au fost calculate utilizând pachetul software mgcv (versiunea 1.4-1) în R (Die R-Stiftung für Statistisches Rechnen, versiunea 2.8.1; Viena, Austria), iar pachetul de statistici SPSS (versiunea 18) a fost dezvoltat pentru care folosește evaluări statistice rămase. Valorile P de ambele părți

---