Disertație pentru obținerea diplomei universitare doctor rerum naturalium (Dr.

Caracterizarea biologică și funcțională a tumorilor din tractul gastro-intestinal prin analiza expresiei genetice la nivelul genomului și identificarea potențialilor markeri tumorali Disertație pentru obținerea diplomei universitare doctor rerum naturalium (Dr. rer. Nat.) Înaintată Consiliului Facultății de Farmacie Biologică a Universității Friedrich Schiller Jena de către biologul absolvent Nicole Posorski născută la 24 noiembrie 1981 în Suhl

obținerea

Lumea este plină de suferință și la fel de plină de depășirea suferinței. (Keller Helen)

Recenzor: prima 2 a 3-a zi a examenului oral.

2 Introducere 3 2 Introducere În ciuda celor mai intense eforturi de cercetare și a cunoștințelor molecular-biologice dobândite în structura generală a cancerului, degenerescența celulară malignă cu cancerele rezultate este încă a doua cea mai frecventă cauză de deces după bolile cardiovasculare (48%) la nivel mondial cu 21%. În 2008, 12,7 milioane de oameni din întreaga lume au fost diagnosticați nou cu cancer, 7,2 milioane dintre ei au murit ca urmare. Pentru anul 2030, sunt prognozate 21,4 milioane de cazuri noi, cu o mortalitate de 13,2 milioane. Fig. 1: Cele mai frecvente 20 de cauze de deces cauzate de cancer în 2008. http://www.dkfz.de/de/krebsatlas/ Dezvoltarea unei tumori maligne este un proces complex, multifactorial, în care sunt necesari mulți pași individuali succesivi. Prima prioritate este de obicei activarea unui proto-oncogen într-o celulă somatică, care este cauzată de influențe externe precum substanțe chimice (benzen, azbest, acrilamidă, tutun etc.), radiații (radiații radioactive, raze X, radiații UV) sau viruși (papilom) Viruși). Prin alte mutații genetice, proteinele modificate pot fi găsite în celula inițiată

3 Obiectivele lucrării 17 1. Determinarea cantitativă a nouă proteine ​​(biomarkeri) în serul pacienților ar trebui să permită diagnosticul cât mai timpuriu posibil al unui carcinom colorectal existent și al polipilor colonului (adenoame). Pentru acest studiu (II.1), s-au examinat serurile de la pacienții cu cancer colorectal. III. Caracterizarea funcțională a proteinelor care joacă un rol crucial în progresia tumorii. 1. Stabilirea unui model in vitro pentru liniile celulare neuroendocrine diferențiate (colorectale). 2. Gena BIRC5 care codifică proteina supraviețină care inhibă apoptoza ar trebui eliminată în liniile celulare neuroendocrine și colorectale, precum și în celulele stem umane, prin care proliferarea celulară ar trebui oprită. 3. Diferențele de concentrație a celor nouă markeri serici pentru cancerul colorectal trebuie testate pe diferite linii celulare colorectale. Pentru aceste studii (III.1 - III.3) s-au utilizat liniile celulare BON, LCC-18, MIP-101, QGP1, Caco-2, Colo-94H și SW-1116.

4 Material și metode 40 4.12 Dispozitive tehnice utilizate Tabelul 9: Dispozitive tehnice utilizate Dispozitive Autoclavă Bloc termostat Cameră video CCD Cameră de electroforeză Dovezi Investigator Microscop de fluorescență (G2565CA) Scanner Congelator Cuptor de hibridizare Cryostat CM 1850 Dispozitiv cu microunde Aparat Nano Drop (Spectrofotometru ND-1000) PCR (Thermo Cycler) microscop cu contrast de fază, fotometru, sistem de filtrare a apei ultrapur, agitator (Rotamix120) software steril de bancă: Extracție caracteristică vs. 10.5.1.1 CGH Analytics v 3.5.14 Gene Spring GX v. 10.0.2 ISIS Vortexer Băi de apă Dulap de încălzire (cuptor) Centrifuge Producător KSG Grant Zeiss Hoefer Randox Axioplan 2 (Zeiss, Jena) Agilent Heraeus Agilent Leica Bosch Meqlab MJ Research Zeiss Uvicon 930 (Kontron Instruments) Milipore; Sereal Heidolph Heraeus Agilent Agilent Agilent Metasystems IKA Medingen/GFL Bachofer Benchtop Centrifuge 5415 D (Eppendorf), Microcentrifuge MiniSpin (Eppendorf) Universal 30 RF (Hettich) Megafuge Rotina 35 R (Heidolph)

6mar [cp10]. Pentru SW-1116 s-a putut evalua 4 MPP, care a arătat un cariotip hipotriploid. Cele patru cariotipuri au fost combinate într-un cariotip (cariotip compozit = cp) după cum urmează: 52