Etichetă proteică - Biologie

Cand Ziua proteinelor, Etichetă de afinitate sau epitop. Zi pentru „marcare”, „etichetă” sau „etichetă”) sunt utilizate în biochimie pentru a descrie diverse secvențe de aminoacizi, în mare parte scurte, care pot fi utilizate pentru a marca proteinele. Proteinele marcate aparțin proteinelor de fuziune.

proteică

Aplicații

Marcajele diferite se potrivesc diferit în scopuri diferite. Acestea sunt utilizate în cursul proiectării proteinelor în producția de proteine ​​recombinante sau în purificarea și detectarea lor prin cromatografie de afinitate, teste de derulare, Western blot, imunohistochimie, microscopie cu fluorescență sau imagistică live.

Pentru a genera o etichetă proteică, secvența codificatoare de ADN a etichetei proteice este inserată în secvența codificatoare ADN a proteinei de fuziune din spatele codonului de pornire sau în fața codonului stop, menținând în același timp cadrul de citire. Acest lucru creează o etichetă de proteină N-terminală sau C-terminală pe proteină în timpul traducerii.

Ocazional, eticheta proteinei trebuie îndepărtată din proteină după curățare, de ex. B. poate fi realizat printr-un situs de scindare a proteazei sau o inteină inductibilă. Abordarea bazată pe proteoliză utilizează proteaze cu o secvență de recunoaștere mai lungă, care se taie numai la interfața etichetei proteine, de ex. B. the TEV-Proteaza. [1] Inteinele pot fi declanșate de tioli sau prin scăderea valorii pH-ului. [2] [3] [4]

Unele etichete au alte funcții în afară de legarea unui anticorp sau imunoconjugat, cum ar fi:

  • Purificarea cromatografică a imunoaffinității (toate cu anticorpii corespunzători)
  • Detecție bazată pe anticorpi (pentru toți, de exemplu prin Western blot, imunohistochimie sau imunofluorescență)
  • Cromatografie de afinitate bazată pe afinitatea față de un alt partener de legare (de exemplu, etichetă CaM, etichetă CBP, etichetă GST, etichetă MBP)
  • Situri de biotinilare pentru purificare cu streptavidină (de exemplu, Avi-Tag, BCCP-Tag, Strep-Tag)
  • Formare complexă cu ioni de nichel divalenți și agaroză sau dextran modificat cu acid nitrilotriacetic și reticulat (de exemplu, His-Tag)
  • Fluorescență (de exemplu, GFP sau etichetă flash)
  • Separare mai ușoară în HPLC datorită polarității crescute (de exemplu, His-Tag, FLAG-Tag, Xpress-Tag)
  • Cisteinele ca grupuri reactive (de exemplu, eticheta GST, eticheta snap, eticheta tioredoxinei)
  • Creșterea solubilității Organisme de incluziune, cu etichete mai mari (de exemplu, etichetă GST, etichetă MBP)
  • Îmbunătățiți plierea proteinelor Organisme de incluziune sau datorită punților disulfură legate incorect (de exemplu, etichetă tioredoxină, etichetă poli (NANP))
  • reacții de precipitare inductibile [5] [6]