Interesul unui test biologic bazat pe activitățile enzimatice ale algelor verzi unicelulare pentru
Activități enzimatice cu potențial interesant
Fosfataza alcalină
Există multe esteraze (carboxil esteraze, acetil esteraze, colesterol esteraze etc.) care joacă diferite roluri în metabolism. Enzimele utilizate în teste aparțin grupului colinesterazelor. Aceste enzime joacă rolul neurotransmițătorilor la anumite specii, dar la plante s-au demonstrat activități non-neuronale, în special un rol în absorbția apei și în fotosinteză [5]. Interesul acestor enzime pentru studiul nostru este că activitatea lor scade în prezența anumitor tipuri de insecticide, cum ar fi carbamații sau organofosfații [1,2,3]. Cuantificarea acestei scăderi a activității va face posibilă determinarea prezenței acestor pesticide în matricea apei. Activitatea acestor enzime este cu atât mai interesantă cu cât pare insensibilă la prezența metalelor grele [2]. Prin urmare, acest test este a priori complementar cu cel al fosfatazei alcaline. Interesul bioanalizei
Utilizarea bioanalizelor bazate pe metabolismul algelor are o serie de avantaje: un răspuns obținut folosind celule întregi (adică cultură de alge fără denaturare) a unui organism reprezentativ pentru baza sistemelor trofice acvatice, un rezultat rapid, un răspuns la un amestec de compoziție variată care integrează biodisponibilitatea poluanților, efectele sinergice sau antagonice ale diferiților constituenți. Cu toate acestea, acest răspuns rămâne calitativ. Obiectivul actual este de a evalua interesul bioanalizelor bazate pe metabolismul algelor pentru a permite detectarea poluanților într-o matrice complexă (de exemplu, în cazul descărcărilor urbane) și astfel pentru a face economii de scară în ceea ce privește analizele fizico-chimice.
Experimente pe diguri de furtună (DO)
Site-uri de studiu
DO-urile selectate pentru acest studiu au fost alese în funcție de mai multe criterii: accesibilitatea descărcării, tipul rețelei (unitară, separată) sau mediul înconjurător (utilizarea terenului, urbanizare etc.).
Măsurători ale activității metabolice
Algele Chlorella vulgaris sunt cultivate în medii pregătite în conformitate cu standardul AFNOR T90-304 [6]. Aceste medii permit satisfacerea tuturor nevoilor nutriționale necesare creșterii algelor. Culturile sunt reînnoite pe tot parcursul anului folosind transplantul regulat (frecvență: la fiecare 10-15 zile). Pentru a obține o activitate maximă de fosfatază alcalină, este necesar ca algele să epuizeze tot fosforul lor intern. Algele din mediul AFNOR sunt deci subculturate în faza de creștere exponențială într-un mediu AFNOR fără fosfat. Această etapă se numește foame și durează 21 de zile. Transplantul de alge se efectuează în condiții sterile folosind o hota cu flux laminar și un arzător cu bunsen. Algele sunt apoi plasate sub agitare într-o cameră întunecată, cu aer condiționat la 20 ° C sub iluminare cu o intensitate a luminii setată la 5000 lux.