MECANISME ȘI MODALITĂȚI DE CROMATOGRAFIE LICHIDĂ

6-CROMATOGRAFIE LICHIDĂ/MECANISME ȘI MODALITĂȚI

Un cromatograf este format din mai multe părți. Elementul central este reprezentat de coloană, care realizează separarea diferiților compuși. Cu toate acestea, acest element vital reprezintă doar 1 - 2% din prețul sistemului complet.

Acest sistem include:

- în amonte 1 sau mai multe pompe și un injector
- în aval 1 sau mai multe detectoare (universale sau specifice)

Prin urmare, există multe variante adaptate nevoilor (sau bugetului) utilizatorilor:

- așa-numitele sisteme izocratic sau dimpotrivă capabil să se formeze gradienți solvenți (acest lucru va fi discutat mai târziu)
- detectoare foarte variabile, mai mult sau mai puțin sensibile, mai mult sau mai puțin specifice, mai mult sau mai puțin sofisticate. În această zonă, alegerea este foarte largă, dar de fapt majoritatea utilizatorilor au detectoare UV sau spectrofotometre (UV sau UV-VIS). Printre detectoarele sofisticate ne putem aminti:

+ detectoare de matrice de diode (măsurare continuă pe mai multe lungimi de undă)
+ detectoare de radioactivitate cu flux continuu
+ spectrometre de masă, spectrometre RMN

Detector

utilizare

Limita de detectare

Linearitatea

Refractometru

Aproximativ 700 ng/ml

UV fix (254 nm)

Aproximativ 0,3 ng/ml

Spectro UV-VIS

Aproximativ 0,3 ng/ml

Aproximativ 0,008 ng/ml

Electrochimic

Aproximativ 0,001 ng/ml

Conductimetric

Selectiv (ioni)

Până la 0,2% diferență
conductivitate între 2 substanțe

Reactor post-coloană

vezi UV sau fluorescență

Spectrometru de masă

Variază în funcție de compus

Radioactivitate

Analize metabolice

Variază în funcție de izotopi

Domeniile de aplicare a cromatografiei lichide sunt foarte variate și această tehnică reprezintă un instrument foarte utilizat, care este utilizat pentru separarea ionilor minerali, a moleculelor organice mici, precum și a macromoleculelor (proteine, polinucleotide, polimeri organici). Există unul sau mai multe moduri cromatografice adecvate pentru fiecare categorie de substanțe. Este la latitudinea tuturor să decidă care dintre ele este cea mai bună pentru treaba pe care vor să o facă !

Există, de fapt reguli generale simple, care permit o alegere motivată a modului cromatografic adecvat; acestea se bazează pe parametri precum dimensiunea, polaritatea și sarcina compușilor care urmează să fie analizați.