Tehnici de purificare a proteinelor; Știri-Medical
Disclaimer: Această pagină este o traducere automată a acestei pagini inițial în engleză. Vă rugăm să rețineți, deoarece traducerile sunt generate automat, nu toate traducerile vor fi perfecte. Acest site web și paginile sale web sunt destinate citirii în limba engleză. Orice traducere a acestui site și a paginilor sale web poate fi inexactă și inexactă, în totalitate sau parțial. Această traducere este furnizată într-o practică.
Tehnicile de inginerie a proteinelor sunt o parte esențială a personalizării sau producerii proteinelor cu proprietăți specifice care pot fi aplicate în diferite procese industriale. Prin urmare, acestea sunt esențiale pentru cercetarea biotehnologică.
Cu toate acestea, aceste metode depind în mare măsură de capacitatea de a izola și purifica proteinele dorite, astfel încât proprietățile lor materiale și chimice să poată fi înțelese, împreună cu structurile lor terțiare și interacțiunile cu liganzi și substraturi.
Intensitatea la care se continuă acest proces de purificare depinde de utilizarea la care se va pune proteina. De exemplu, proteinele farmaceutice și alimentare trebuie să fie aduse la un grad ridicat de puritate și să treacă prin mai multe etape succesive, posibil doar, deoarece cu fiecare operație o anumită proteină va fi inevitabil distrusă.
Purificarea moleculelor de proteine este mai simplă decât compușii proteici de purificare.
Pasul 1: Produceți un extract de proteină brută
Extractele brute de proteine intracelulare sunt preparate prin lizarea celulei folosind metode chimice sau mecanice. Mizeria este apoi îndepărtată prin centrifugare. A da un supernatant corect este departe de a fi forma pură, fiind amestecat cu multe alte macroinstrucțiuni și micro-molecule.
Proteinele extracelulare se obțin prin centrifugarea soluției și îndepărtarea celulelor. O metodă specifică pentru a obține un extract brut al enzimelor termostabile este încălzirea amestecului pentru a denatura alte proteine și apoi răcirea acestuia pentru a prelua proteinele termostabile de interes, centrifugându-l în cele din urmă pentru a elimina proteinele denaturate.
Pasul 2: purificare intermediară
Sărare
Proteinele dintr-un extract brut sunt apoi purificate prin precipitarea lor dintr-o soluție de sare foarte concentrată, cum ar fi sulfatul de amoniu. Acest lucru funcționează pe baza solubilității mai scăzute a proteinei la concentrații mari de sare. Cu toate acestea, nu toate proteinele precipită la aceeași concentrație de sare, ceea ce înseamnă că sărarea ajută și la descompunerea proteinelor. Poate fi folosit și pentru concentrarea proteinelor în soluție. Această operație crește puritatea de trei ori și 92% din proteina din soluție este recuperată.
Dializă
Proteinele sunt molecule mari și acest lucru înseamnă că sărurile proteice vor fi menținute prin trecerea soluției printr-o membrană semipermeabilă. Celuloza este o membrană tipică pentru dializă. Dializa nu poate fi utilizată pentru a separa proteinele cu diferite greutăți moleculare.
Cromatografie
Alte tehnici utilizate pentru îndepărtarea proteinelor exterioare sărate includ cromatografia și filtrarea cu excludere pe gel. Acestea sunt acum disponibile ca kituri preformate pentru multe proteine normale și sunt adesea potrivite pentru procese de mare putere.
Filtrarea pe gel funcționează pe baza separării dimensiunilor de către o coloană de bile de polimer poros, cum ar fi dextran sau agaroză. Moleculele mari pot trece numai prin spațiile dintre tocuri, în timp ce cele mai mici ocupă aceste două spații și spațiul din interiorul tocurilor, încetinindu-le. Astfel, eluantul conține molecule care apar în ordinea mărimii lor, de la mai mare la mai mic. Se utilizează, de asemenea, tehnici de cromatografie cu fază inversă sau schimb de ioni, care funcționează pe baza proprietăților hidrofobe diferențiale și, respectiv, a sarcinii. Cromatografia în fază inversă poate fi limitată în aplicarea sa din cauza unei posibile denaturări a proteinelor de către solvenți organici.