Identificarea proteinei ClpB (peptidaza cazeinolitică B), mimetică a neuropeptidei

rezumat

Disciplinat

Mecanisme experimentale/celulare și moleculare.

proteinei

Introducerea și scopul studiului

Au fost identificate numeroase modificări ale microbiotei intestinale (sau disbioză) la pacienții cu obezitate sau anorexie. Într-adevăr, s-a arătat o creștere a populației aparținând ordinii Enterobacteriaceae și în special a tulpinii Escherichia coli în anorexie. Această creștere a fost invers corelată cu indicele de masă corporală. Astfel, Enterobacteriaceae ar putea juca un rol cheie în dezvoltarea și/sau menținerea tulburărilor alimentare și a obezității. Studii recente au arătat că tulpina Escherichia coli K12 (E coli) aparținând Enterobacteriaceae este capabilă să producă o proteină care imită neuropeptida anorectică α-MSH (Hormonul stimulator al α-melanocitelor): ClpB (protează cazeinolitică B). Scopul acestui studiu este de a confirma expresia ClpB într-o altă tulpină de enterobacterie, 4597. Hafnia alvei printr-o abordare proteomică LC-MS/MS numită „achiziție independentă de date”(DIA).

Material si metode

Pentru acest studiu, proteinele din trei culturi de H. alvei 4597 și E. coli K12 au fost folosite. Pentru a detecta numai proteinele având secvențe similare cu α-MSH, s-a efectuat imunoprecipitarea cu un anticorp anti-α-MSH și apoi s-a efectuat o tehnică DIA LC-MS/MS. Datele obținute au fost analizate utilizând software-ul Spectronaut Pulsar 11 (Biognosys), iar rezultatele au fost încrucișate cu bazele de date ale „E coli (UniProt TrEMBL, 83333) șiH.alvei (UniProt TrEMBL, 13337) pentru a identifica proteinele. Doar proteine ​​cu Valoarea Q 0,001 și unul schimbare log2 ori > 0,4 ​​au fost luate în considerare în acest studiu.