Prot; ines

Proteină. Purificare (Exerciții)

purificarea proteinelor implică mai multe tehnici în cromatografie, precipitare a sării, electroforeză, centrifugare.

Intrebarea 1.
Care sunt motivele utilizării precipitațiilor de sulfat de amoniu ca etapă inițială de purificare a proteinelor?
(Raspunsul 1)

Răspunsuri. Detalii Răspuns pentru Q1 (Intrebarea 1)
Precipitarea sulfatului de amoniu (fracționarea prin sulfat de amoniu, sărare) folosește criteriul solubilității proteinelor. Face posibilă concentrarea proteinei de interes prin precipitarea într-o manieră nespecifică a unei proporții în general mari din proteinele conținute în extractul total. Se obține un extract brut (purificare parțială) a proteinei, care poate fi ulterior supus unor etape de purificare.

Răspunsuri. Detalii (continuare) Răspuns pentru Q2 (Intrebarea 2)
Pentru a elua proteinele legate de o rășină schimbătoare de ioni, sunt oferite două posibilități: 1/utilizați un gradient de pH sau sare (în general NaCl). Dacă optăm pentru utilizarea unui gradient de NaCl, de obicei începem cu un tampon cu rezistență ionică scăzută, urmat de o serie de tampoane a căror concentrație de NaCl crește treptat (se poate utiliza un gradient continuu de formare). Ionii Na + sau Cl- detașează proteinele din coloană prin neutralizarea sarcinilor negative sau pozitive care permit proteinelor să interacționeze cu rășina. Rezultatul este eluarea proteinelor în funcție de densitatea lor de încărcare. De fapt, pentru a fi detașate de o coloană de schimb cationic (CM-celuloză), proteinele cu mai puține sarcini pozitive vor necesita mai puțini ioni Cl (deci o concentrație mai mică de NaCI) pentru a-și neutraliza sarcinile decât proteinele cu sarcini mai pozitive. Aceeași logică se aplică și ionilor Na + în timpul eluției proteinelor atașate la o rășină schimbătoare de anioni (DEAE-celuloză).

prin urmare

În cazul acestui exercițiu, putem concluziona că:
- mioglobina va elua mai întâi, deoarece nu se va atașa la coloană (pH

- pI de urează (5.4) este mai aproape de pH-ul tamponului decât pI de ovalbumină (4.6): ureaza va avea deci o sarcină netă globală mai puțin negativă decât ovalbumină. Prin urmare, putem prezice că ureasa va elua la o concentrație mai mică de NaCl decât este necesară pentru a elua ovalbumina.