Tehnici de gastrectomie a mânecii și de bypass gastric Roux-en-Y modificat la protocolul șoarecilor

Abstract

Introducere

Cu toate acestea, procedurile bariatrice sunt dificil de adaptat direct la modelele de animale mici și necesită o dexteritate chirurgicală ridicată. În timp ce SG poate fi efectuat cu ușurință la rozătoare cu o rată de supraviețuire foarte bună, DGRY este letal la șoareci din cauza obstrucțiilor intestinale severe 5. Au fost propuse diferite tehnici DGRY modificate pentru a remedia această problemă, în special oesojejunostomia. Aici vă prezentăm o altă alternativă: gastrojejunostomia fără excizie a stomacului. Acest DGRY modificat imită majoritatea efectelor benefice observate la om (de exemplu, o reducere semnificativă a greutății corporale și îmbunătățirea glicemiei și a homeostaziei lipidelor).

Acest manuscris își propune să rezume și să discute detaliile tehnice și experimentale ale SG și DGRY la șoareci și să faciliteze aceste proceduri cu ajutorul videoclipurilor. Un punct culminant particular va fi făcut în ceea ce privește optimizarea protocoalelor de îngrijire preoperatorie și postoperatorie, care permit reducerea deficiențelor de vitamine și fier.

Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.

Protocol

Animale și locuințe: Obțineți vârsta de 8 săptămâni de la șoareci masculi C57BL/6. La vârsta de 10 săptămâni, oferiți C57BL/6 acces gratuit la apă și o dietă bogată în grăsimi (dietă DIO: 35% kcal de grăsimi, 25,8% cazeină, 1,30% AINS minerale, 1,30% vitamine, 1,70% fosfat dicalcic, 0,7 carbonat% calciu, 2,10% citrat de potasiu, 0,026% bitartrat de colină, 8,9% zaharoză, 0,384% cistină, 6,5% celuloză, 31,7% untură de porc, 3,3% ulei de soia și 16,29% maltodextrină) timp de 8 (SG) sau 14 (RYGB) săptămâni înainte de operațiile de slăbire. Pentru a promova creșterea în greutate, dați mouse-ului dedicat intervenției chirurgicale DGRY (sham și DGRY) apă care conține 20% fructoză (g/v) pe lângă dieta bogată în grăsimi.

Declarație de etică: Toți pașii de protocol descriși mai jos, urmează liniile directoare ale comitetului de etică pentru experimentarea animalelor din Pays de la Loire sub numărul de aprobare 01.953.01.

1. pregătire generală preoperatorie

2. gastrectomie cu maneca: procedura chirurgicala

3. Bypass gastric Roux-en-Y: Procedură chirurgicală

4. Îngrijiri generale postoperatorii

  1. Opriți izofluranul și continuați cu un debit de O 2 de 0,8 L/min până când mouse-ul este complet treaz. Nu lăsați mouse-ul nesupravegheat până când nu recâștigă controlul motorului, indicat de animalele care pleacă să se deplaseze în jurul cuștii și să poată sta și să meargă fără să cadă.
  2. Așezați mouse-ul (doar un mouse pe cușcă) într-un cuptor la 30 ° C, condiții de temperatură timp de 5 zile.
  3. Mențineți suplimente de fier (0,5 mg/kg/zi, injecție subcutanată) și vitamine (800 mg/180 ml în apă) la șoareci DGRY până la sfârșitul protocolului.
  4. Reveniți la acces gratuit la alimente cu gel alimentar (dietă bogată în gel: 10% untură de porc, 10% zahăr lichid, 57% apă) timp de 5 zile după operație. Reintroduceți alimentele solide la 3 zile după operație.
  5. Se injectează subcutanat buprenorfină (0,1 mg/kg, de două ori pe zi, din ziua 0 până în ziua 3 după operație), meloxicam (1 mg/kg, din ziua 0 până în ziua 3 după operație), metoclopramidă (1 mg/kg, ziua 0 până la 5 zile după operație) și marbofloxacină (10 mg/kg, ziua 0 până la ziua 3 aFTE Surgery r).

5. Parametrii metabolici postoperatori

  1. Măsură de consumul alimentar
    1. Lăsați șoarecii să se recupereze timp de 1 săptămână după operație. Șoarecele de lângă o cușcă. Măsurați cantitatea de hrană solidă plasată în cușcă. Greutatea rămasă 24 de ore mai târziu. Repetați acest pas atât timp cât este necesar.
  2. Test de toleranță orală la glucoză
    1. Rapid șoarecii timp de 6 ore înainte de bolus oral. Colectați o picătură de sânge din vârful cozii și aplicați-o pe o bandă de glucoză introdusă într-un glucometru pentru a determina valoarea 0 a glicemiei.
    2. Se administrează un bolus oral cu soluție 20% D-glucoză (2 g/kg). Măsurați nivelurile de glucoză din sânge la 15, 30, 60 și 120 de minute după gavaj.
  3. Analiza nivelurilor de hemoglobină
    1. Folosind un sistem de hematologie, măsurați 20 µl de sânge proaspăt pentru a testa nivelul hemoglobinei.
". Eutanasierea> 6

  1. Anesteziați șoarecii prin injectarea intraperitoneală a unei soluții de xilazină/ketamină (10/80 mg/kg). Efectuați o luxație cervicală. Verificați eutanasierea completă, asigurându-vă că inima nu bate și reflexul clipirii globului ocular este pierdut.

Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.

Rezultate reprezentative

Termeni și condiții

Timpul mediu de funcționare pentru procedura SG a fost de 49,3 ± 1,5 min. Am eliminat 62,8 ± 5,0 mg din stomac, ceea ce reprezintă aproximativ 80% din stomac. Nici un șoarec nu a murit în timpul operației sau în următoarele șapte zile. Un șoarece (7,1%) a murit în ziua 11 postoperatorie din cauza obstrucției gastrice cauzate de un bezoar.

Timpul mediu de funcționare pentru procedura DGRY a fost de 89,1 ± 2,8 min. Rata mortalității a fost semnificativ mai mare după DGRY (fals: 25% față de DGRY: 66,6%; p = 0,038). Principalele cauze ale decesului postoperator au fost scurgerile anastomotice (n = 8), stenoza anastomotică (n = 5), complicațiile anesteziei (n = 4) și hemoragia postoperatorie (n = 2). De asemenea, am observat două decese pe termen lung cauzate de gastro-stenoză a anastomozei cu obstrucție cronică și malnutriție. După cum se arată în figura 3, am observat o îmbunătățire treptată a ratei de supraviețuire postoperatorie de-a lungul protocolului, indicând faptul că este necesară o pregătire chirurgicală intensivă pentru a stăpâni tehnica chirurgicală DGRY.