Departamentul de Fiziologie Nutritivă - PDF Descărcare gratuită
Catedra de fiziologie nutrițională Influența izoflavonoidelor genisteină și daidzeină asupra proteomei celulelor endoteliale umane in vitro și a celulelor sanguine mononucleare in vivo în contextul activității lor anti-aterogene postulate Dagmar Fuchs Copia completă a Centrului științific Weihenstephan pentru nutriție, utilizare a terenurilor și mediu de la Universitatea Tehnică din München Obținerea gradului de disertație aprobată de doctor în științe. Președinte: Prof. univ. Dr. rer. nat. Michael Schemann Examinator al disertației: 1. Prof. univ. Dr. rer. nat. Hannelore Daniel Univ. 2 Prof. univ. Dr. rer. nat. Gerald Rimbach, Christian-Albrechts-Universität zu Kiel Disertația a fost depusă la Universitatea Tehnică din München la 6 aprilie 2006 și acceptată de Centrul de Științe Weihenstephan pentru Nutriție, Utilizarea Terenului și Mediu la 19 iunie 2006.
Cuprins iii 10.6 Grunduri utilizate. 142 10.7 Produse chimice și consumabile. 143 10.8 Dispozitive. 146 10.9 Tampoane și soluții. 147 10.10 Mulțumiri. 152 10.11 Curriculum Vitae. 153
1 Introducere 5 Procesul reglementat de oxisteroli și citokine determină în mod decisiv stabilitatea plăcii (Lusis AJ, 2000). Fig. 1.2 Reprezentarea schematică a fazelor timpurii ale aterogenezei. Stratul endotelial este deteriorat: LDL pătrunde în intimă, unde este modificat oxidativ. Monocitele intră în peretele vasului și absorb particulele LDL oxidate, astfel încât se formează celule de spumă (Stipanuk MH, 2000). MM-LDL, LDL ușor oxidat; ox-ldl, LDL oxidat; M-CSF, factor de stimulare a coloniei de macrofage; MCP-1, proteină chimiotactică monocitară.
1 Introducere 7 Fig. 1.4 Metabolismul homocisteinei (modificat de la Biesalski HK & Grimm P., 2004) Baza genetică a hiperhomocisteinemiei Hiperhomocisteinemia (HHcy), care este cauzată de un defect al enzimei genetice sau datorită unei cantități insuficiente de una sau mai multe vitamine implicate în metabolismul homocisteinei este un important factor de risc independent pentru ateroscleroză (Clarke R și colab., 1991; McCully KS, 1996; Selhub J, 1999; Ueland PM și colab., 2000). HHcy poate fi împărțit în trei grade diferite de severitate. Forma ușoară, care afectează 5-7% din populație, are niveluri plasmatice peste 10 µmol/l de Hcy. Nivelul plasmatic al pacienților cu HHcy moderat este peste 30 µmol/l și în varianta severă peste 100 µmol/l (Brattstrom L și Wilcken DEL, 2000). Chiar și cu HHcy ușor, riscul de apariție a aterosclerozei este crescut (Lawrence de Koning AB și colab., 2003), relația cu mortalitatea fiind cea mai mare la niveluri plasmatice peste 15 µmol/l (Nygard O și colab., 1997). HHcy se poate datora diferitelor defecte genetice care afectează enzimele cistationina β sintază, metilen tetrahidrofolat reductază (MTHFR) și metionină sintază (Medina MA și Amores-Sánchez MI, 2000). Relevanța acestor defecte enzimatice este explicată în secțiunile următoare. Cea mai frecventă cauză de HHcy severă sau homocistinurie este o deficiență autozomală recesivă, homozigotă a cistationinei-β-sintazei. Au fost descrise mai mult de 60 de mutații diferite ale genei, cu schimbul de
1 Introducere 13 Fosfogliceridele scad. Esterii colesterolului formați prin LCAT se instalează în interiorul HDL. Colesterolul provenit din membranele țesuturilor extrahepatice se poate lega astfel de suprafața HDL, ceea ce duce la formarea fracției HDL 3. Reacțiile catalizate de LCAT și absorbția substanțelor (fosfolipide, apolipoproteine C și E), care au fost eliberate în timpul descompunerii VLDL, duc la HDL 2 și HDL 1, care sunt în cele din urmă defalcate în ficat (vezi Fig. 1.5) (Löffler G & Petrides PE, 2003). Fig. 1.5 Metabolism lipidic postprandial. Metabolismul lipidic postprandial este împărțit în transfer lipidic exogen, endogen și invers. (CETP, proteină de transfer a esterului colesterolului) (Deetjen și colab., 2004).
1 Introducere 18 Agoniștii BAX și BCL-X se bazează pe eliberarea factorilor pro-apoptotici, în special citocromul C, din mitocondrii. Prin legarea la factorul 1 și caspaza-9 asociată cu apoptoza, citocromul C formează așa-numitul apoptozom, care activează caspaza-3 și astfel pune în mișcare apoptoza. Concentrația membrilor anti-apoptotici ai familiei Bcl-2, care inhibă eliberarea citocromului C din mitocondrii, este redusă de ox-ldl (Metzler B și colab., 2000; Napoli C și colab., 2000). Mai mult, ox-ldl crește expresia citokinelor precum IL-1, TNF și PDGF, care la rândul lor activează SAPK/JNK (Metzler B și colab., 2000). Printr-un proces în care sunt implicați lizozomii și proteazele lizozomale, ox-ldl poate provoca, de asemenea, apoptoză relativ independent de caspaze (Salvayre R și colab. 2002).
4 Rezultate 38 Fig. 4.2 2D-PAGE reprezentativă a proteinelor din HUVEC care au fost cultivate cu 5 µg/ml ox-ldl în absența și prezența a 2,5 µm sau 25 µm genisteină. Numerele spot sunt identice cu cele din Tabelul 10.2. Investigațiile privind efectul amestecului izoflavonoid de genisteină și daidzeină, precum și extractul S40cl pe proteomul HUVEC nu au putut fi efectuate, deoarece o cantitate foarte mare de HUVEC a trebuit păstrată în cultură pentru a obține o cantitate suficientă de proteine pentru analiza proteomului, care din motive tehnice și financiare nu a putut fi realizat.